離心機使用注意事項

　　離心機使用注意事項

　　一. 離心機在預冷狀態(tài)時(shí)，離心機蓋必須關(guān)閉，離心結束后取出轉頭要倒置于實(shí)驗臺上，擦干腔內余水，離心機蓋處于打開(kāi)狀態(tài)。

　　二. 轉頭在預冷時(shí)轉頭蓋可擺放在離心機的平臺上，或擺放在實(shí)驗臺上，千萬(wàn)不可不擰緊浮放在轉頭上，因為一旦誤啟動(dòng)，轉頭蓋就會(huì )飛出，造成事故!

　　三. 轉頭蓋在擰緊后一定要用手指觸摸轉頭與轉蓋之間有無(wú)縫隙，如有縫隙要擰開(kāi)重新擰緊，直至確認無(wú)縫隙方可啟動(dòng)離心機。

　　四. 在離心過(guò)程中，操作人員不得離開(kāi)離心機室，一旦發(fā)生異常情況操作人員不能關(guān)電源POWER)，要按STOP。在預冷前要填寫(xiě)好離心機使用記錄。

　　五. 不得使用偽劣的離心管，不得使用老化、變形、有裂紋的離心管。

　　六. 在節假日和晚間最后一個(gè)使用離心機例行安全檢查后方能離去。七. 在儀器使用過(guò)程中發(fā)生機器故障，部件損壞情況時(shí)要及時(shí)與技術(shù)人員聯(lián)系。

　　運行注意事項

　　為了確保安全和離心效果，儀器必須放置在堅固水平的臺面上，工程塑料蓋門(mén)上不得放置任何物品;樣品必須對稱(chēng)放置，并在開(kāi)機前確保已擰緊螺母。

　　使用前應檢查轉子是否有傷痕、腐蝕等現象，同時(shí)應對離心杯做裂紋、老化等方面的檢查，發(fā)現有疑問(wèn)立即停止使用，并與廠(chǎng)方聯(lián)系;開(kāi)機運轉前請務(wù)必擰緊轉頭的壓緊螺帽，以免高速旋轉的轉頭飛出造成事故。

　　轉速設定不得超過(guò)最高轉速，以確保機器安全運轉。

　　使用中如果出現 0.00或其他數字，機器不運轉，應關(guān)機斷電，10秒后重新開(kāi)機，待所設轉速顯示后，再按運轉鍵，機器將照常運轉。

　　如需分離樣品的比重超過(guò) 1.2克/立方厘米，最高轉速N必須按下式修正：N=N MAX *(1.2/樣品比重) 1/2 ，N MAX =轉子極限轉速。

　　不得在機器運轉過(guò)程中或轉子未停穩的情況下打開(kāi)蓋門(mén)，以免發(fā)生事故。

　　離心杯必須等量灌注樣品，切不要使轉頭在不平衡的狀況下運行。

　　離心機一次運行最好不要超過(guò) 60分鐘。

　　離心機必須可靠接地;機器不使用，請拔掉電源插頭。

　　使用注意事項

　　※1、離心機在運轉時(shí)，不得移動(dòng)離心機。

　　※2、安放離心機的地面應堅實(shí)平整，二只調平螺桿調節使離心機與地面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。

　　※3、離心管加液應稱(chēng)量平衡，若加液差異過(guò)大運轉時(shí)會(huì )產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應停機檢查，使加液符合要求，離心

　　試管必須成偶數對稱(chēng)放入。

　　※4、若運行時(shí)有離心試管破裂，會(huì )引起較大振動(dòng)應立即停機處理。

　　※5、每次停機后再開(kāi)機的時(shí)間間隔不得少于5分鐘，以免壓縮機堵轉而損壞。

　　※6、每次離心完成后，必須將轉子取出，否則長(cháng)時(shí)間放在軸上，可能銹死，轉子會(huì )取不出而造成離心機整機報廢。

　　※7、電源必須有接地線(xiàn)。

　　※8、本機轉子使用壽命為三年，過(guò)期應更換轉子。

　　※9、所有轉子不能超過(guò)其最高轉速使用。

　　離心機 是借離心力分離液相非均一體系的設備。根據物質(zhì)的沉降系數、質(zhì)量、密度等的不同，應用強大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮和提純的方法稱(chēng)為離心。一般說(shuō)， 離心機轉速在 20 000r/min 以上的稱(chēng)為超速離心。離心技術(shù)，特別是超速離心技術(shù)是分子生物學(xué)、生物化學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的手段。

　　1924 年 T.Svedberg 和 Rinde 研制出世界上第一臺渦輪超速離心機以來(lái)，發(fā)展非常迅速，現在已廣泛地應用到科學(xué)研究和生產(chǎn)的各個(gè)領(lǐng)域�，F在離心機轉頭最高轉速已達 100000 r/min ，最大離心力達 700 000 g 。

　　離心機 作為一種手段，具有許多優(yōu)點(diǎn)。例如，超速離心可在低溫下操作，保護了生物大分子的活性。制備型的離心機負載量大，一次可分離提純幾克樣品，比層析、電泳上的樣品量大得多。分析離心機不僅可測物質(zhì)的分子量，還可檢驗物質(zhì)的純度、構象、沉降系數等。因此離心技術(shù)在生物學(xué)研究中占有重要的地位，是分離、純化細胞、病毒、蛋白、核酸和酶的最方便最有效的工具。

　　( 二 ) 離心原理

　　當含有細小顆粒的懸浮液靜置不動(dòng)時(shí)，由于重力場(chǎng)的作用使得懸浮的顆粒逐漸下沉。粒子越重，下沉越快，反之密度比液體小的粒子就會(huì )上浮。微粒在重力場(chǎng)下移動(dòng)的速度與微粒的大小、形態(tài)和密度有關(guān)，并且又與重力場(chǎng)的強度及液體的粘度有關(guān)。象紅血球大小的顆粒，直徑為數微米，就可以在通常重力作用下觀(guān)察到它們的

　　沉降過(guò)程。

　　此外，物質(zhì)在介質(zhì)中沉降時(shí)還伴隨有擴散現象。擴散是無(wú)條件的絕對的。擴散與物質(zhì)的質(zhì)量成反比，顆粒越小擴散越嚴重。而沉降是相對的，有條件的，要受到外力才能運動(dòng)。沉降與物體重量成正比，顆粒越大沉降越快。對小于幾微米的微粒如病毒或蛋白質(zhì)等，它們在溶液中成膠體或半膠體狀態(tài)，僅僅利用重力是不可能觀(guān)察到沉降過(guò)程的。因為顆粒越小沉降越慢，而擴散現象則越嚴重。所以需要利用離心機產(chǎn)生強大的離心力，才能迫使這些微�？朔�擴散產(chǎn)生沉降運動(dòng)。

　　離心就是利用離心機轉子高速旋轉產(chǎn)生的強大的離心力，加快液體中顆粒的沉降速度，把樣品中不同沉降系數和浮力密度的物質(zhì)分離開(kāi)。離心力 (F) 的大小取決于離心轉頭的角速度 ( ω ， r/min) 和物質(zhì)顆粒距離心軸的距離 (r ， cm) 。它們的關(guān)系是： F = ω 2R

　　為方便起見(jiàn)， F 常用相對離心力也就是地心引力的倍數表示。即把 F 值除以重力加速度 g ( 約等于9.8m/s2.) 得到離心力是重力的多少倍，稱(chēng)作多少個(gè) g 。例如離心機轉頭平均半徑是 6cm ，當轉速是 60 000

　　r/min 時(shí)，離心力是 240 000 × g ，表示此時(shí)作用在被離心物質(zhì)上的離心力是日常地心引力的 24 萬(wàn)倍。因此，轉速 r/min 和離心力 g 值之間并不是成正比關(guān)系，還和半徑有關(guān)。同樣的轉速，半徑大一倍，離心力 (g 值 ) 也大一倍。轉速 (r/min) 和離心力 (g 值 ) 之間的關(guān)系可用下式換算：

　　式中： r 為半徑 (cm) ， g 為離心力 (g 值 )

　　(三 ) 超速離心機的離心方法

　　用離心方法分離生物大分子和亞細胞物質(zhì)的基本原理是根據它們在液體介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區帶，或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開(kāi)。前者是沉降速度法，應用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要小于樣品中最小顆粒的密度，離心時(shí)選用高轉速和短時(shí)間;后者是沉降平衡法，應用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要大于樣品中最小顆粒的密度，離心時(shí)選用較低轉速和較長(cháng)時(shí)間。實(shí)際操作有幾種形式：

　　1. 差速離心這種方法是選擇不同轉速的離心，分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液，在高速離心上清沉降中等顆粒，最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上情液的方法，把不同大小的顆粒分開(kāi)。

　　這種方法比較簡(jiǎn)單，方便。分離的組份沉到管底，因此可以迅速濃縮所要的組份，減少體積。但回收率和純度是有矛盾的，要提高回收率，勢必提高轉速或延長(cháng)離心時(shí)間，這樣大小相近的顆粒也會(huì )沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。

　　2. 速度區帶 ( 或速度梯度 ) 離心 本法是將樣品放在一個(gè)連續的密度梯度液體上，通過(guò)離心，大顆粒沉降快，小顆粒沉降慢。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子，因此把各種組份分開(kāi)來(lái)。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì)，如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多，但分子量不一樣，用本法很容易將其分

　　開(kāi)。但對密度不同、大小類(lèi)似的物質(zhì)則不易分離。蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液 (5%-60%) 配成梯度，用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區帶里的各個(gè)組份。

　　(四)保養注意事項

　　1.清潔離心機腔體和轉頭，并擦干腔內冷凝水。

　　2.使用完后要打開(kāi)門(mén)，直至腔內恢復常溫。

　　3.離心之前要平衡樣品。

　　4.離心之后要注意消毒和滅菌。

　　5.根據需要選用tubes/bottles、adapters以及spacers，根據要求加樣品量。

　　6.必要時(shí)預冷轉子。

　　7.轉頭的維護和存放,注意保護底部的計數環(huán)。

　　8.工具的準確使用和轉頭的正確安裝。