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    無(wú)菌檢測，無(wú)懼超級抗生素！---賽多利斯實(shí)驗室

    [2019/4/12]

    無(wú)菌檢測，無(wú)懼超級抗生素！---賽多利斯實(shí)驗室
    開(kāi)展以下試驗是用于證明Sterisart®系統在過(guò)濾完硫酸多粘菌素B后，仍可以讓微生物在其中正常生長(cháng)。
    實(shí)驗背景
    在沒(méi)有抑制劑的情況下，微生物可以快速增殖。在培養基加入系統之前，可能存在于無(wú)菌檢測藥品樣品中的任何防腐劑或抗生素殘留物都必須被沖洗去除。由于多粘菌素不能被中和，所有與樣品接觸的部件必須為低吸附，且所采用的設計形式必須保證能夠實(shí)現徹底沖洗從而去除所有殘留。
    試驗描述
    Sterisart® 系統經(jīng)無(wú)菌生理鹽水潤濕后，對硫酸多粘菌素B溶液進(jìn)行過(guò)濾。在完成沖洗步驟之后，根據歐洲藥典要求，將硫乙醇酸鹽液體培養基加入Sterisart® 系統的一個(gè)容器內。向這個(gè)容器內接種50-100CFU微生物，進(jìn)行微生物培養，最多培養3天。
     
    材料和設備
    抗生素硫酸多粘菌素B 批號：A 1411058
    檢測菌株 
    綠膿桿菌 
    硫乙醇酸鹽液體培養基 
    NaCl
    Merck;
    泵
    Sterisart®通用型無(wú)菌檢測泵
    Sterisart®通用型無(wú)菌檢測泵
    Sterisart® 裝置
    Sterisart® NF,
    Sterisart® NF適配器
    檢測準備
    1
    無(wú)菌生理鹽水
    為制備0.9%的無(wú)菌生理鹽水溶液，先將9g固體NaCl溶解于1L去離子水中，裝入帶有隔膜的瓶中，制備2L。然后對配制完成的溶液進(jìn)行121°C、40分鐘的高壓蒸汽滅菌
    2
    抗生素溶液的溶解(20 g/L)
    2.1  背景
    抗生素的溶解是無(wú)菌檢測操作中非常關(guān)鍵的操作步驟。未溶解的殘留抗生素會(huì )被膜過(guò)濾器截留，導致培養過(guò)程中抑制微生物生長(cháng)。試驗表明使用30°C的生理鹽水溶解硫酸多粘菌素B最為迅速可靠。更為詳細的試驗描述和試驗結果請參考Sterisart® 應用指南No.1。針對下一步驟，我們還專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)了一種注入和搖勻的方法。生理鹽水的預熱可通過(guò)培養箱或水浴輕松實(shí)現。
    2.2  樣品制備
    取事先準備好一個(gè)帶有隔膜的500ml瓶(瓶A)， 內含10g抗生素混合物。將Sterisart® NF適配器16470的無(wú)標識管路插入泵中，然后將16470帶有黃色標記的長(cháng)針頭插入瓶B的隔膜中，該瓶?jì)妊b有500ml已預熱至30°C的無(wú)菌生理鹽水；進(jìn)而將短針頭插入裝有抗生素的瓶A的隔膜中。瓶A以一定角度倒置，使
    抗生素凍干粉落到瓶頸處。然后將NaCl溶液以設定值為300的泵速打入裝有抗生素的瓶A中。


    大約5秒鐘后，將瓶A恢復正位，讓抗生素和NaCl溶液一起回落到瓶底。流體的泵入壓力要足以將粘在玻璃瓶壁上的抗生素沖洗下來(lái)。向瓶A注入溶液到500ml刻度，然后搖動(dòng)瓶子直至抗生素完全溶解。以上操作步驟使用了貨號為16470的Sterisart®NF適配器和貨號為16413的Sterisart®通用型無(wú)菌檢測泵，該泵是現有16420無(wú)菌檢測泵的上一代產(chǎn)品。有關(guān)Sterisart® NF 適配器16470使用的詳細信息見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
     試驗方法
    膜過(guò)濾
    將Sterisart® 系統16466裝入泵中后，向系統泵入100ml無(wú)菌生理鹽水，用于潤濕濾膜。然后向Sterisart® 系統中泵入無(wú)菌空氣以排空溶液。隨后，500ml溶解好的抗生素經(jīng)容器濾過(guò)。需特別當心，避免抗生素液體沾到后續無(wú)法沖洗到的區域。再次用無(wú)菌空氣排空裝置。隨后用5×200ml無(wú)菌生理鹽水沖洗濾膜，以確保無(wú)抗生素殘留在膜和塑料部件上，從而不會(huì )抑制微生物的生長(cháng)。有關(guān)Sterisart®NF裝置的詳細使用信息見(jiàn)所附產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
    注入培養基
    將100ml硫乙醇酸鹽液體培養基注入Sterisart® 系統兩個(gè)容器中的一個(gè)。用夾子將管路夾緊封好，在距夾子約10cm處切斷管路。第二個(gè)容器用于進(jìn)一步檢測。
    接種微生物
    硫酸多粘菌素B適用于多數革蘭氏陰性細菌。因此試驗使用綠膿桿菌(革蘭氏陰性菌)。通過(guò)系列稀釋方式確保每ml綠膿桿菌溶液中含50-100CFU菌。取
    1.0ml綠膿桿菌溶液加入硫乙醇酸鹽液體培養基中。
    培養
    Sterisart® 容器在30 °C條件下培養3天。每天檢查微生物的生長(cháng)情況。
    結果
    培養48h后，可明顯觀(guān)察到微生物在Sterisart® 容器內生長(cháng)。培養基非常渾濁（生長(cháng)情況良好）。


    結論
    使用5×200ml生理鹽水沖洗即可確�？股氐挠行コ�。微生物生長(cháng)試驗結果表明測試所用硫酸多粘菌素B在Sterisart®系統內沒(méi)有殘留，不存在促進(jìn)或抑制微生物生長(cháng)效應。
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