新一代細菌內毒素檢測技術(shù)----定量法鱟試驗應用介紹

細菌內毒素（既熱原）是革蘭氏陰性菌細胞壁的主要成分，少量的內毒素靜脈注射就可以引起發(fā)燒即“熱原反應”，大劑量注射則可引起血液循環(huán)障礙和內毒素休克，嚴重時(shí)甚至導致死亡。因此，生物制品類(lèi)、注射用藥劑、化學(xué)藥品類(lèi)、放射性藥物、抗生素類(lèi)、疫苗類(lèi)、透析液等制劑以及植入性醫療器材必須經(jīng)過(guò)細菌內毒素檢測試驗合格后才能使用。

 

鱟試驗 法是國際上至今為止檢測內毒素最好的方法，它簡(jiǎn)單﹑快速﹑靈敏﹑準確，因而被歐美藥典及我國藥典定為法定內毒素檢查法。該法具有靈敏度高、特異性強和操作簡(jiǎn)便快捷等特點(diǎn)，逐步取代家兔熱原試驗，成為注射用藥、靜脈用藥、醫療器械、食品、水源細菌內毒素檢測的最佳方法。

 

鱟試驗法所用的試劑為從海洋動(dòng)物鱟的變形細胞溶解物提取的鱟試劑。目前國內市場(chǎng)上的鱟試劑大多為凝膠法鱟試劑。凝膠法鱟試劑是根據鱟血變形細胞裂解物和細菌內毒素反應，形成凝膠來(lái)目測判斷是否有細菌內毒素存在，此方法無(wú)法準確定量。只能得出大于或等于內毒素限值或者小于內毒素限值的定性結果。

 

近年來(lái)鱟試驗法的應用范圍不斷開(kāi)拓，多種原因導致了凝膠法鱟試劑已經(jīng)不能滿(mǎn)足鱟試驗法發(fā)展的需求：

 

一、制藥工業(yè)生產(chǎn)工藝流程的細菌內毒素水平動(dòng)態(tài)監控必須要采用定量法鱟試劑。目前凝膠法鱟試劑大多用于制藥工業(yè)成品出廠(chǎng)前的內毒素限量試驗。如果發(fā)現內毒素含量等于或者大于內毒素限值，該批產(chǎn)品不合格，必須銷(xiāo)毀。不合格品的出現將會(huì )對制藥企業(yè)產(chǎn)生重大經(jīng)濟損失。而采用定量法鱟試劑對生產(chǎn)工藝流程進(jìn)行內毒素水平的動(dòng)態(tài)監控，在內毒素水平升高，但還未達到或超過(guò)內毒素限值時(shí)及時(shí)發(fā)現問(wèn)題，可以避免企業(yè)的經(jīng)濟損失。

 

制藥行業(yè)實(shí)行新版GMP的要求：
（1）藥品生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制為質(zhì)量控制中的事前控制。
（2）對生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)控制。
（3）要求取樣方便、微量、操作簡(jiǎn)單、快速、檢查準確可靠并能自動(dòng)處理數據。

定量法鱟試劑靈敏度高，操作自動(dòng)化，可以準確定量，最適于監控內毒素含量的變化趨勢，可以有效控制各環(huán)節操作，及時(shí)反饋信息給相關(guān)操作部門(mén)，能更直觀(guān)和更好地控制內毒素，可以大大減少不必要的損失。

 

二、在臨床醫學(xué)上，病人體液中的細菌內毒素水平定量檢測具有重大意義。病人體液的細菌內毒素含量直接體現了革蘭氏陰性菌感染的程度。體液內毒素水平檢測可以用于快速診斷革蘭氏陰性菌感染引起的膿毒癥及內毒素血癥。由革蘭氏陰性菌所引起的內毒素血癥及膿毒血癥目前仍是臨床上的主要死亡原因之一。作為臨床早期診斷革蘭氏陰性菌感染的細菌學(xué)培養需要幾天時(shí)間，不僅耗時(shí)長(cháng)，而且培養陽(yáng)性率很低。廈門(mén)市鱟試劑實(shí)驗廠(chǎng)有限公司內毒素檢測鱟試劑盒（動(dòng)態(tài)濁度法）采用獨特配方樣本處理液，有效排除了血漿中各種干擾因素對鱟試驗的干擾，在2小時(shí)之內準確檢測血漿細菌內毒素含量，是革蘭氏陰性菌感染早期診斷的最佳方法之一。

 

三、根據鱟試劑中的G因子旁路反應而設計的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖定量檢測鱟試驗是早期快速診斷深部真菌感染的好方法。近年來(lái)隨著(zhù)廣譜抗生素、激素和免疫抑制劑以及各種導管插管等治療手段的廣泛應用，深部真菌感染的發(fā)病率日漸增高。免疫功能低下患者，如 HIV感染者，糖尿病患者，外科大手術(shù)術(shù)后患者等，也易發(fā)生深部真菌感染。目前，深部真菌感染已成為免疫功能低下患者發(fā)病和死亡最常見(jiàn)的原因。診斷真菌病需要進(jìn)行真菌培養，耗時(shí)長(cháng),培養陽(yáng)性率很低。廈門(mén)市鱟試劑實(shí)驗廠(chǎng)有限公司生產(chǎn)出真菌葡聚糖檢測試劑盒（動(dòng)態(tài)濁度法）可以在2小時(shí)內定量檢測人血漿中的（1,3）-β-D-葡聚糖。為早期快速診斷深部真菌感染診斷提供準確依據。

 

定量法鱟試驗在藥典上稱(chēng)為光度測定法。分為濁度法和顯色基質(zhì)法。濁度法鱟試劑是利用光學(xué)檢測系統讀取在形成凝膠的過(guò)程中反應液渾濁度升高的快慢和內毒素濃度成反比例的關(guān)系由軟件轉換成內毒素的濃度。而顯色基質(zhì)法是在反應液中添加人工合成的顯色基質(zhì)，根據反應液中內毒素濃度和在孵育終止時(shí)釋放出的顯色基團的量之間成正比，定量檢測樣品中的內毒素濃度。

 

無(wú)論是動(dòng)態(tài)濁度法和顯色法鱟試驗均需要帶良好溫育系統的動(dòng)態(tài)光度測定儀器及配套專(zhuān)業(yè)的內毒素和真菌葡聚糖檢測軟件。lonza品牌的內毒素是美國原裝進(jìn)口鱟試驗微生物檢測系統是專(zhuān)門(mén)為細菌內毒素及真菌葡聚糖定量檢測鱟試驗設計的微生物檢測系統。 配套lonza品牌下WinKQCL內毒素檢測與分析軟件、LONZA內毒素檢測儀和其他輔助儀器及除熱原耗材，適用于所有的定量法鱟實(shí)驗，是內毒素檢測首選推薦機型。