凝膠電泳操作注意事項

1．選用優(yōu)質(zhì)的瓊脂糖：不同品牌的瓊脂糖在質(zhì)量上有較大的差異。劣質(zhì)瓊脂糖會(huì )導致DNA條帶模糊，甚至條帶缺失。因此請盡量選擇質(zhì)量穩定可靠的品牌。 

2．選擇適當的凝膠濃度：

瓊脂糖凝膠的線(xiàn)性DNA分辨范圍

3．凝膠制備：配制凝膠和電泳應選用相同的1x緩沖液；使用的容器體積至少是凝膠溶液的3倍，以免溶液沸騰時(shí)溢出；制膠過(guò)程中盡量趕除氣泡；根據樣品的濃度和體積選擇適當大小的梳子。

4．選擇適當的電泳緩沖液：GenStar® SD緩沖液（Cat. No. E101-50）和TBE緩沖液適用于分離比較小的DNA片段，TAE緩沖液（Cat. No. E102-50）適用于分離比較大的DNA片段；緩沖液應及時(shí)更新；膠回收純化應使用新鮮配制的1x電泳緩沖液，以防核酸酶和DNA雜帶污染。

5．核酸樣品的準備：提取的DNA樣品應去除蛋白和多余的鹽分等雜質(zhì)；PCR樣品應盡量在24小時(shí)內電泳檢測，否則條帶容易模糊。

6．上樣緩沖液：所有泳道應使用相同的上樣緩沖液，以防止因離子強度不同造成條帶遷移率偏差。

7．適量上樣：上樣過(guò)多會(huì )導致上樣孔超載，出現拖帶現象；上樣體積過(guò)小可能導致條帶亮度不均。

8．電壓及電泳時(shí)間：根據電泳槽型號、凝膠濃度、電泳緩沖液種類(lèi)和目的條帶大小等選擇適當的電壓和電泳時(shí)間。使用GenStar®SD電泳緩沖液時(shí)，電壓設置為20~35 v/cm膠長(cháng)；使用TAE或TBE緩沖液時(shí)，最大電壓以不超過(guò)20 v/cm膠長(cháng)為宜。