熒光技術(shù)在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中的作用

　　紫外分析儀中熒光技術(shù)在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中應用主要包括以下幾個(gè)方面： 　

　　1、物質(zhì)的定性：不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更高的選擇性。 　

　　2、定量測定：利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測定的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，例如維生素B2的測定限量可達1毫微克/毫升，這一優(yōu)點(diǎn)使測定時(shí)所需要樣品量大大減少。這種定量測定方法還可應用于酶催化的反應，只要反應前后有熒光強度的變化，就可用來(lái)測定酶的含量及酶反應的速率等。 　

　　3、研究生物大分子的物理化學(xué)特性及其分子的結構和構象：熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數不僅和分子內熒光發(fā)色基團的本身結構有關(guān)，而且還強烈地依賴(lài)于發(fā)色團周?chē)�的環(huán)境，即對周?chē)�環(huán)境十分敏感。利用此特點(diǎn)可通過(guò)測定上述有關(guān)熒光參數的變化來(lái)研究熒光發(fā)色團所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團（如色氨酸、酪氨酸、鳥(niǎo)苷酸等，此類(lèi)熒光稱(chēng)為內源熒光）以外，可將一些特殊的熒光染料分子共價(jià)地結合或吸附在生物大分子的某一部位，通過(guò)測定該染料分子的熒光特性變化來(lái)研究生物大分子，這種染料分子被稱(chēng)為“熒光探針”，它們發(fā)出的熒光一般稱(chēng)為外源熒光。熒光探針的應用，大大地開(kāi)拓了熒光技術(shù)在分子生物學(xué)中的應用范圍�！� 　

　　4、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數可以研究生物大分子中的能量轉移現象：通過(guò)該現象的研究，可以獲得生物大分子內部的許多信息。

　　以往人們常用熒光偏振做指標來(lái)研究生物大分子動(dòng)力學(xué)。人們趨于用熒光偏振隨時(shí)間的衰減來(lái)研究這些問(wèn)題。在這種方法中，激發(fā)光不是一連續的面偏振光，而是一偏振的光脈沖，因此測得的F∥和F是在兩個(gè)不同方向上偏振的熒光隨時(shí)間的衰減，它既和熒光壽命τ有關(guān)，又與分子在溶液中的運動(dòng)有關(guān)，因此常表示為F∥（t）和F⊥（t）。由它們可得一相當重要的物理量---各向異性參數A（t）。由A（t）可推測生物大分子的形狀、分子轉動(dòng)弛豫時(shí)間（即從一個(gè)定向的狀態(tài)到一個(gè)無(wú)定向狀態(tài)所要的時(shí)間），進(jìn)而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的轉動(dòng)角度和時(shí)間之間的函數關(guān)系。由這些結果可以研究分子之間的相互作用、分子間結合的緊密程度、蛋白質(zhì)、核酸分子的解聚程度等等。 　

　　另外，熒光技術(shù)在免疫學(xué)中亦有廣泛的應用。最重要的就是熒光抗體法。將某些熒光染料與血清抗體相結合，這種標記的抗體仍可專(zhuān)一地與相應抗原發(fā)生結合，形成的復合體具有熒光特性，從而可以確定抗原或抗體的存在及其含量。