蛋白質(zhì)的直接定量（UV法）

　　分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。 這種方法是在280nm波長(cháng)，直接測試蛋白。

　　具體使用：

　　選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過(guò)程非常簡(jiǎn)單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm 的“背景”信息，設定此功能“開(kāi)”。與測試核酸類(lèi)似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，最佳的線(xiàn)性范圍在1.0-1.5 之間。實(shí)驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)現讀數“漂移”。這是一個(gè)正常的現象。事實(shí)上，只要觀(guān)察A280的吸光值的變化范圍不超過(guò)1%，表明結果非常穩定。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數，只要吸光值有少許改變，濃度就會(huì )被放大，從而顯得結果很不穩定。

　　可能存在的誤差：

　　蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來(lái)說(shuō)，速度快，操作簡(jiǎn)單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾;另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高，都可能出現一定的誤差。