細胞培養四部曲

　　1.細胞培養：細胞培養條件為含有 10% 胎牛血清的培養液(根據不同的細胞選擇合適的細胞培養液)，37℃下在含有 5% CO2 的培養箱中培養。

　　2.細胞凍存：細胞消化后收集， 1000rpm 離心 5min ，去上清，用 1ml 含有 10% DMSO的培養液重懸，逐級降溫后轉入-70℃凍存 24h，轉入液氮中長(cháng)期保存。

　　3.細胞復蘇：將液氮中凍存的細胞取出， 37℃水浴中融化，取出后 1000rpm 離心 5min ，去上清，用培養液重懸后接入培養皿或培養瓶中培養。

　　4.細胞傳代：對于貼壁細胞將培養皿或培養瓶中的培液吸干， 用滅過(guò)菌的 1×PBS 沖洗后加入一定量的 0.25% 胰酶消化，待鏡下觀(guān)察細胞變圓且還未漂起時(shí)，加入有血清的正常培液終止消化，吹打細胞成細胞懸液后將細胞接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。對于懸浮細胞可以直接傳代也可以離心法傳代。直接傳代是讓?xiě)腋〖毎�慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸�?/2-2/3，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。離心法傳代是將細胞連同培養液一并轉移到離心管內， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養液到離心管內，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。