細胞培養中的污染問(wèn)題小匯總

　　細胞培養中常見(jiàn)的污染情況總結如下:

　　常見(jiàn)的污染如下：

　　1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會(huì )渾濁變黃，對細胞生長(cháng)影響明顯。

　　仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話(huà)有可能造成儲存液污染，一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象!

　　可在培養液中加相應的抗生素處理

　　2、霉菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長(cháng)，但時(shí)間長(cháng)之后，細胞的活力狀態(tài)變差，

　　用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤(pán)里也加上飽和量的硫酸銅�；蛘咴谂囵B箱的托盤(pán)加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

　　CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時(shí)轉移，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右)，尤其在多雨的季節。

　　其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。

　　預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線(xiàn)菌素D或雙抗;但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線(xiàn)菌素D或雙抗都于事無(wú)補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，就要注意操作

　　3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會(huì )渾濁，原體感染，國內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

　　用泰樂(lè )菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養，無(wú)任何不良反應。Sigma公司的使用時(shí)用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話(huà), 建議用8ug/ml的濃度。

　　4、黑蛟蟲(chóng)：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去，培養液也是不渾的，一般不會(huì )太影響，細胞還是可以用 的。常常是細胞生長(cháng)狀態(tài)良好，且觀(guān)測到的運動(dòng)物無(wú)明顯增多，且培養液顏色、透明度無(wú)明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發(fā)現類(lèi)似現象。對細胞生長(cháng)狀態(tài) 不會(huì )有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會(huì )自然消失，除更換血清外無(wú)須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話(huà)，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生 存率。

　　5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開(kāi)始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會(huì )長(cháng) 出很細的黑色絲狀物。真菌生長(cháng)的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

　　6、原蟲(chóng)：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點(diǎn)狀物數量非常多，輕微活動(dòng)，細胞雖然可以生長(cháng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細 胞不透亮。他們與細胞可共生但會(huì )與細胞爭奪營(yíng)養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優(yōu)勢所以不會(huì )影響到細胞的正常生長(cháng)，只有當他們到達一定的 數量時(shí)就會(huì )影響到細胞的生長(cháng)，最終形成惡性循環(huán)。

　　污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等等

　　關(guān)于培養基的無(wú)菌狀況，取培養基至培養瓶中(不加細胞)，37度試培養一段時(shí)間后觀(guān)察。如果沒(méi)有細菌生長(cháng) 就是操作的問(wèn)題。

　　也可以在培養基中事先加入雙抗(硫酸鏈霉素和氨芐青霉素)。但雙抗有時(shí)會(huì )影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗結果。

　　1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內的水應是三蒸水

　　2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素

　　3、超凈臺的風(fēng)機不能過(guò)大，風(fēng)機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染

　　4、無(wú)菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。