蛋白質(zhì)酶的提取

　　大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數與脂類(lèi)結合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。

　　1.有機溶劑提取法

　　一些和脂質(zhì)結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質(zhì)和酶，不溶于水、稀鹽溶液、稀酸或稀堿中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對提取一些與脂質(zhì)結合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別優(yōu)越，一是因為丁醇親脂性強，特別是溶解磷脂的能力強;二是丁醇兼具親水性，在溶解度范圍內(度為10%，40度為6.6%)不會(huì )引起酶的變性失活。另外，丁醇提取法的pH及溫度選擇范圍較廣，也適用于動(dòng)植物及微生物材料。

　　2.水溶液提取法

　　稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質(zhì)穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時(shí)需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解。提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。一方面，多數蛋白質(zhì)的溶解度隨著(zhù)溫度的升高而增大，因此，溫度高利于溶解，縮短提取時(shí)間。但另一方面，溫度升高會(huì )使蛋白質(zhì)變性失活，因此，基于這一點(diǎn)考慮提取蛋白質(zhì)和酶時(shí)一般采用低溫(5度以下)操作。為了避免蛋白質(zhì)提以過(guò)程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑(如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等)。

　　提取液的pH值和鹽濃度的選擇：

　　1.pH值

　　蛋白質(zhì)酶是具有等電點(diǎn)的兩性電解質(zhì)，提取液的pH值應選擇在偏離等電點(diǎn)兩側的pH 范圍內。用稀酸或稀堿提取時(shí)，應防止過(guò)酸或過(guò)堿而引起蛋白質(zhì)可解離基團發(fā)生變化，從而導致蛋白質(zhì)構象的不可逆變化，一般來(lái)說(shuō)，堿性蛋白質(zhì)用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白質(zhì)用偏堿性的提取液。

　　2.鹽濃度

　　稀濃度可促進(jìn)蛋白質(zhì)的溶，稱(chēng)為鹽溶作用。同時(shí)稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質(zhì)部分結合，具有保護蛋白質(zhì)不易變性的優(yōu)點(diǎn)，因此在提取液中加入少量NaCl等中性鹽，一般以0.15摩爾。升濃度為宜。緩沖液常采用0.02-0.05M磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液。