肉類(lèi)中三聚氰胺的檢測方案

　　酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過(guò)均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測定。先將三聚氰胺酶標記物，樣品萃取物及標準加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應。在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒(méi)有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。再用去離子水清洗結束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無(wú)色的底物轉化為藍色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應，根據各孔顏色深淺進(jìn)行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

　　需要準備的材料：

　　1、蒸餾水或去離子水

　　2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸頭

　　3、4000轉離心機

　　4、吸水紙或相當的吸水材料

　　5、450nm的酶標儀

　　6、計時(shí)器

　　7、20mM PBS：需自行配制

　　8、清洗液：需自行配制

　　試劑配制：

　　1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml

　　2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

　　樣品的前處理： 肉類(lèi)(稀釋倍數：5)

　　1、 稱(chēng)1g肉樣，加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs，震蕩2min;

　　2、 4000轉離心5min;

　　3、 取2ml 上清液加入2ml異辛烷：氯仿(2：3)，混勻;

　　4、 4000轉離心5min，取上層150ul測定。[/b]

　　測定過(guò)程：

　　1、將所有試劑及樣品回升至室溫20-28℃，但不要放置超過(guò)24小時(shí);

　　2、從鋁箔袋中拿出要求數量的微孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條與干燥劑一同放入密封袋中保存;

　　3、吸取150ul標準品、樣品到對應微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。加入

　　50ul三聚氰胺酶標記物到每個(gè)小孔中;

　　4、輕輕搖板60秒，20-28攝氏度下孵育30分鐘;

　　5、將微孔中的溶液倒入水槽中，用清洗液完全充滿(mǎn)微孔，震蕩后倒掉，重復三次，總共四次洗板;

　　6、最后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉微孔板在吸水紙上拍干;

　　7、每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液;

　　8、20-28攝氏度下，孵育30分鐘;

　　9、每個(gè)微孔中加入100ul停止液;

　　10、450nm下讀板。