色譜柱維護保養在液相色譜中的應用

　　科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應用。生物醫學(xué)的發(fā)展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對研究的對象進(jìn)行定性和定量的研究。

　　色譜作為一種分離技術(shù)與方法，自本世紀初起已經(jīng)有100多年的歷史了，現在已經(jīng)成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要的分支。在人類(lèi)進(jìn)入新時(shí)代之際，人們面臨著(zhù)在信息科學(xué)、生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的快速發(fā)展的挑戰，在這些領(lǐng)域人才的需求成為國家高度發(fā)展的至關(guān)重要的因素。而色譜技術(shù)是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)必不可少的手段和工具。根據最近的統計在全世界各類(lèi)分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營(yíng)銷(xiāo)總額占25%-30%。

　　科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應用。生物醫學(xué)的發(fā)展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對研究的對象進(jìn)行定性和定量的研究。

　　1色譜柱的相關(guān)性質(zhì)

　　1.1色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤(pán)管形、U形管等形狀。

　　1.2分類(lèi)：色譜柱可分為填充柱和開(kāi)管柱兩大類(lèi)。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡(jiǎn)單而言：常見(jiàn)的分配住填料：碳十八柱(ODS/C18)、碳八柱(Octy了/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、碳一注(Methyl/C1)、陰離子交換柱(SAX)、陽(yáng)離子交換柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)。常見(jiàn)的吸附柱填料：硅膠柱

　　色譜柱的選擇會(huì )直接影響混合物中組分的分離。舉例來(lái)講：對于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長(cháng)的限制，分離能力有限，主要應用于簡(jiǎn)單化合物的分離。

　　2色譜柱的維護與保養

　　2.1色譜柱的維護。我們在使用新的色譜柱應該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來(lái)測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。而且在使用的過(guò)程中常常有堵塞的現象，造成這種現象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④柱內不溶物的形成等。如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進(jìn)行修復，首先，使用含鹽緩沖液后(如離子對試劑)應用溶解性強的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。其次，先斷開(kāi)檢測器，然后用對來(lái)自樣品中的物質(zhì)有強溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應避免溶劑的pH低于2或高于8。最后如果經(jīng)過(guò)上述還是沒(méi)有修復，色譜柱壓力還是沒(méi)有下降，則要斷開(kāi)檢測器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5ml/min流速沖洗一小時(shí)。如果壓力不下降，則要看內置過(guò)濾器是否被堵塞，如果被堵塞應沖洗或更換，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被徹底恢復，只能通過(guò)去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復。而且修復的厚度是2-5mm。

　　2.2色譜柱的保養。色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結果保存起來(lái)，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進(jìn)行測試以后，我們要根據不同的情況對色譜柱進(jìn)行保養：①反相色譜柱每天實(shí)驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長(cháng)期保存色譜柱：如色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷�，正相柱可以�(xún)Υ嬗趪栏衩撍�后的純正己烷中，離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒?含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中，并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。

　　概括起來(lái)就是：①柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動(dòng);②當柱子和色譜儀聯(lián)結時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈;③要注意流動(dòng)相的脫氣;④避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相;⑤進(jìn)樣樣品要提純;⑥嚴格控制進(jìn)樣量;⑦每天分析工作結束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品;⑧每天分析測定結束后，都要用適當的溶劑來(lái)清洗柱;⑨若分析柱長(cháng)期不使用，應用適當有機溶劑保存并封閉。

　　3色譜柱的維護與保養在高壓液相色譜中的應用

　　高效液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來(lái)的分離分析技術(shù)，是現代分離測定的重要手段。問(wèn)世以來(lái)，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品，會(huì )隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數增加，出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行徹底清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：

　　3.1反相柱分別用甲醇:水=90:10，純甲醇(HPLC級)，異丙醇(HPLC級)，二氯甲烷(HPLC級)等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

　　3.2正相柱分別用正己烷(HPLC級)，異丙醇(HPLC級)，二氯甲烷(HPLC級)，甲醇(HPLC級)等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過(guò)高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴格脫水。

　　3.3離子交換柱長(cháng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

　　另外，還可以選擇能溶解柱內污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調回來(lái)，但可能會(huì )造成柱內擔體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。

　　加強色譜柱的維護與保養對于色譜柱高壓液相色譜中應用有著(zhù)重要的意義，制定色譜柱管理的標準操作規程并嚴格執行。每一根新購進(jìn)的色譜柱必須造冊登記，內容包括：生產(chǎn)公司、品名、型號、規格、購進(jìn)時(shí)間、啟用時(shí)間、單價(jià)、柱內保護溶液等。色譜柱分類(lèi)存放，硅膠柱、化學(xué)鍵合硅膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹(shù)脂柱、凝膠柱各用一個(gè)色譜柱盒，盒上貼上標簽，注明類(lèi)別。隨柱說(shuō)明書(shū)裝入密實(shí)袋附在登記本上。每啟用一根色譜柱，在色譜柱上貼上標簽，注明啟用日期。每根柱子每?jì)蓚�(gè)月保養一次，特別是對于一些使用頻率少的柱子，因為放置時(shí)間長(cháng)，容易干柱，每一次做好保養記錄。對于確已失效的柱子，做好停用記錄，不能隨意丟棄，專(zhuān)門(mén)存放，如果現用的柱子的填料需要填補，可以用存放的柱子的填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門(mén)，對于使用時(shí)間較長(cháng)柱效降低的柱子，可把它用于檢測產(chǎn)品的中間體。

　　加強色譜柱的維護與保養對于高壓液相色譜的發(fā)展有著(zhù)重要的意義，高壓液相色譜系統其中就包括色譜柱，因此，加強色譜柱的維護與保養有利于高壓液相色譜的發(fā)展，推動(dòng)我國的醫療事業(yè)的發(fā)展。