一種簡(jiǎn)單快速的miRNA檢測新方法

　　“賽默飛之生物通2012實(shí)驗室創(chuàng )新技術(shù)大獎”評選活動(dòng)開(kāi)展以來(lái)，陸陸續續收到不少項目，這些項目中有的能減少實(shí)驗步驟，有的能降低實(shí)驗成本，還有一些改進(jìn)了實(shí)驗設備，讓我們的實(shí)驗過(guò)程更加輕松。

　　參選項目：一種簡(jiǎn)單快速的miRNA檢測新方法----液相雜交顯色法

　　背景：MicroRNAs(miRNAs)是近年來(lái)發(fā)現的在進(jìn)化上高度保守的一類(lèi)非編碼小RNA(~22nt)。它作為轉錄后關(guān)鍵的基因表達調控子可參與幾乎所有的生理和病理過(guò)程，革新了我們對基因表達調控的傳統認識。miRNAs的檢測是其功能研究的基礎，但小片段的特性使其檢測十分困難。

　　PCR和Northernblot是目前檢測單個(gè)miRNA最廣泛使用的兩種方法。PCR方法敏感性高，但假陽(yáng)性的憂(yōu)慮和引物設計的困難限制了它的使用。Northernblot是非常有效的檢測工具，但傳統的固相雜交技術(shù)程序復雜、時(shí)間漫長(cháng)且操作不便。新出現的液相雜交技術(shù)檢測速度快，但需要特定的熒光信號檢測儀器。

　　方法改進(jìn)：我們這里報道一種新的miRNA檢測方法：液相雜交顯色法(LHCD)。

　　這種方法是將提取純化的小RNA與5’端生物素標記的DNA探針進(jìn)行液相雜交，接著(zhù)用核酸外切酶消化多余的探針，再將雜交液點(diǎn)于尼龍膜上，之后ABC孵育，最后BCIP/NBP、DAB或者ECL顯色。

　　LHCD能夠區別miRNA家族成員間一個(gè)堿基的差異，其靈敏度可以達到2.5fmol，全過(guò)程耗時(shí)不到3個(gè)小時(shí)。本方法由于整合了快速液相雜交和親和素-生物素信號放大系統(ABC)兩大技術(shù)，不但實(shí)現了miRNA的簡(jiǎn)單、快速、高靈敏度檢測，其可視化的信號目測，還省去了昂貴的信號檢測儀。此外，本方法簡(jiǎn)單的操作流程，使其容易學(xué)習和方便使用。