凝膠色譜的應用

　　1、分子量的測定

　　根據凝膠色譜的原理，樣品物質(zhì)在凝膠色譜柱中的洗脫性質(zhì)與該物質(zhì)的分子大小有關(guān)。因此選用不同的凝膠色譜柱后，能方便地測定物質(zhì)的分子量。用此法測定分子量時(shí)，可以在各種PH值、離子強度和溫度條件下進(jìn)行。所測定的物質(zhì)可以是天然狀態(tài)，也可以是變性后的。 實(shí)際應用中，可先選用一系列已知分子量的標準樣品在同一色譜條件下進(jìn)行色譜分離分析，并以保留體積(或保留時(shí)間)對分子量的對數作圖，在一定分子量范圍內得到一直線(xiàn)(標準曲線(xiàn))，而后根據待測定物在同一條件下的保留體積(或保留時(shí)間)，從標準曲線(xiàn)上查得/計算出其分子量。 目前用本法測定分子量的應用范圍非常廣泛。 高分子物質(zhì)的分子量及其分布的測定：特別是近年來(lái)，隨著(zhù)各種高分子材料的問(wèn)世，人們對高分子科學(xué)的不斷探索，高聚物的分子量及其分布的測定顯得尤為重要，成為科研和生產(chǎn)中不可缺少的測試項目之一。例如：常見(jiàn)的聚苯乙烯塑料制品，其分子量為十幾萬(wàn)，如果聚苯乙烯的分子量低至幾千，就不能成型;相反，當分子量大到幾百萬(wàn)，甚至幾千萬(wàn)，它又難以加工，失去了實(shí)用意義�？蒲泻蜕�產(chǎn)上通過(guò)控制高聚物的分子量及其分布寬度指數D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲線(xiàn)、分子量積分分布曲線(xiàn)來(lái)生產(chǎn)出性能最佳的高聚物產(chǎn)品。同樣，除了快速測定分子量及其分布以外，凝膠滲透色譜還廣泛被用于研究高聚物的支化度，共聚物的組成分布及高聚物中微量添加劑的分析等方面。如果配以在線(xiàn)的絕對分子量檢測器(如：LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等)，凝膠滲透色譜可以測定高聚物的絕對分子量。 蛋白質(zhì)分子量的測定：現代蛋白質(zhì)藥物的研究中，凝膠色譜法測定分子量是蛋白質(zhì)分子量的快速測定方法之一。一般選用標準分子量蛋白質(zhì)(如：鐵蛋白、醛縮酶、牛血清白蛋白、卵清蛋白、胃蛋白酶、核糖核酸酶，這就是一組分子量從300KD到14KD的標準品)。

　　2、分離多組分混合物

　　在一個(gè)多組分混合物中，因各組分的分子量的不同，可以用凝膠色譜法將其各組分分開(kāi)。當被分離組分的分子量相距較大時(shí)，如進(jìn)行蛋白質(zhì)和氨基酸，核酸和核苷酸等分離時(shí)，選擇大顆粒、高交聯(lián)度的凝膠。而當分離物質(zhì)的分子量差別較小，則選擇一種膠粒能使被分離的組分均包括在該膠粒的分布范圍內。

　　3、脫鹽與分離純化

　　特別是在生物大分子的分離純化過(guò)程中，經(jīng)常使用鹽進(jìn)行鹽析或洗脫，其高濃度的鹽會(huì )給下一步的純化帶來(lái)不便，因此需將其全部或大部分除去。透析法除鹽不僅耗時(shí)較長(cháng)，而且較煩瑣。凝膠色譜脫鹽就是一種簡(jiǎn)單又快速的方法。由于脫鹽是將分子量相距很大的兩類(lèi)物質(zhì)的分開(kāi)，所以一般用于脫鹽的凝膠多為大顆粒、高交聯(lián)度的凝膠。此時(shí)，溶液中大分子(如蛋白質(zhì))的kd=0，鹽類(lèi)的kd=1，易于分離脫鹽。實(shí)際中常用G-25進(jìn)行脫鹽，其效果不僅比透析法快的多，而且比較完全，并且回收率高。

　　4、去熱源

　　熱源是微生物產(chǎn)生的某些可以使人發(fā)熱的物質(zhì)，多為內毒素，是制藥中必須去除的物質(zhì)。內毒素是一個(gè)含脂肪A、糖類(lèi)和蛋白，是帶負電的復合大分子。內毒素經(jīng)常是多聚體，凝膠過(guò)濾層析可有效地將之去除，特別是在小分子藥物。選用的凝膠可以與脫鹽類(lèi)似，只是此時(shí)熱源等大分子物質(zhì)的kd=0，而小分子藥物的kd=1，同樣可以很好而且很方便地去除熱源類(lèi)物質(zhì)。