選購HPLC時(shí)應考慮的幾個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題

HPLC系統一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線(xiàn)脫氣機、自動(dòng)進(jìn)樣器、預柱或保護柱、柱溫控制器等，現代HPLC儀還有微機控制系統，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數據處理。制備型HPLC儀還備有自動(dòng)餾分收集裝置。

最早的液相色譜儀由粗糙的高壓泵、低效的柱、固定波長(cháng)的檢測器、繪圖儀，繪出的峰是通過(guò)手工測量計算峰面積。后來(lái)的高壓泵精度很高并可編程進(jìn)行梯度洗脫，柱填料從單一品種發(fā)展至幾百種類(lèi)型，檢測器從單波長(cháng)至可變波長(cháng)檢測器、可得三維色譜圖的二極管陣列檢測器、可確證物質(zhì)結構的質(zhì)譜檢測器。數據處理不再用繪圖儀，逐漸取而代之的是最簡(jiǎn)單的積分儀、計算機、工作站及網(wǎng)絡(luò )處理系統。

目前常見(jiàn)的HPLC儀生產(chǎn)廠(chǎng)家國外有Waters公司、Agilent公司（原HP公司）、島津公司等，國內有大連依利特公司、上海分析儀器廠(chǎng)、北京分析儀器廠(chǎng)等……

一、輸液泵

輸液泵是HPLC系統中最重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個(gè)系統的質(zhì)量和分析結果的可靠性。輸液泵應具備如下性能：①流量穩定，其RSD應＜0.5%，這對定性定量的準確性至關(guān)重要；②流量范圍寬，分析型應在0.1~10 ml/min范圍內連續可調，制備型應能達到100 ml/min；③輸出壓力高，一般應能達到150~300 kg/cm2；④液缸容積��；⑤密封性能好，耐腐蝕。

泵的種類(lèi)很多，按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵。恒流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔膜往復泵。恒壓泵受柱阻影響，流量不穩定；螺旋泵缸體太大，這兩種泵已被淘汰。目前應用最多的是柱塞往復泵。

柱塞往復泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易于清洗和更換流動(dòng)相，特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫；改變電機轉速能方便地調節流量，流量不受柱阻影響；泵壓可達400 kg/cm2。其主要缺點(diǎn)是輸出的脈沖性較大，現多采用雙泵系統來(lái)克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式，一般說(shuō)來(lái)并聯(lián)泵的流量重現性較好（RSD為0.1%左右，串聯(lián)泵為0.2~0.3%），但出故障的機會(huì )較多（因多一單向閥），價(jià)格也較貴。

二、進(jìn)樣器

早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器，裝在色譜柱入口處�，F在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對色譜系統的壓力、流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。

1．隔膜進(jìn)樣。用微量注射器將樣品注入專(zhuān)門(mén)設計的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎等于零，可以獲得最佳的柱效，且價(jià)格便宜，操作方便。但不能在高壓下使用（如10MPa以上）；此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應，使進(jìn)樣重復性只能達到1~2%；加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到，常規分析使用受到限制。

2．停流進(jìn)樣�？杀苊庠诟邏合逻M(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì )出現“鬼峰”；另一缺點(diǎn)是保留時(shí)間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。

3．閥進(jìn)樣。一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥（以美國Rheodyne公司的7725和7725i型最常見(jiàn)），其關(guān)鍵部件由圓形密封墊（轉子）和固定底座（定子）組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在，柱效率低于隔膜進(jìn)樣（約下降5~10%左右），但耐高壓（35~40MPa），進(jìn)樣量準確，重復性好（0.5%），操作方便。

4．自動(dòng)進(jìn)樣。用于大量樣品的常規分析。