購買(mǎi)國外細胞株應該注意的事項

由于現在國內的細胞庫資料不是很充足，而且比較零散，包括建株時(shí)的技術(shù)層面不一，沒(méi)有比較嚴格統一的操作規范，所以在遇到比較重要的實(shí)驗項目時(shí)，一般都比較傾向于購買(mǎi)國外的細胞株，但購買(mǎi)國外細胞株需要考慮的因素有如下幾點(diǎn)：

1、細胞株的生物等級，由于有些細胞株及菌株屬于管制品，所以從國外購貨比較麻煩。

2、在購買(mǎi)國外細胞株時(shí)，需交待國外加比較多的干冰（一般在13公斤以上，采用比較密封的泡沫盒加套紙箱。

3、報關(guān)時(shí)盡量提供比較充足的證明材料，以免擔擱時(shí)間而導致干冰揮發(fā)完細胞株死亡，甚至于被退回給發(fā)貨人。

4、如果通過(guò)國外細胞株在國內的代理商購買(mǎi)的話(huà)，合同中需注明以下一些內容：

a.明確的到貨時(shí)間，這個(gè)時(shí)間需注明的是工作日，還是普通日。

b.采用什么樣的運輸方法？

c.如果屬于技術(shù)外的因素而細胞株無(wú)法培養活，供方需負什么樣的責任？

d.細胞株的詳細資料，以及細胞株的代數，其中，ATCC的細胞株一般都在幾十代,這個(gè)需要與國外確認，IST-Banca可與他們的代理商聯(lián)系索取詳細資料！

e.需在合同中注明原裝進(jìn)口，避免相關(guān)公司魚(yú)龍渾雜，從國外購買(mǎi)回一株細胞株，經(jīng)過(guò)培養傳代后，同時(shí)供應給幾個(gè)人；一般國外進(jìn)口的細胞株都會(huì )有原裝的凍存管，而且每一支凍存管上都會(huì )有批號，而且每次的批號都不一樣。

f.在決定購買(mǎi)細胞株之前，必須仔細閱讀他們的培養信息，所謂“細胞株未到，培養基先行一步”。

g.在接到細胞株后，最好要求供應公司的人員現場(chǎng)參與，從而用于確認責任。

h.在培養前，請確認您的二氧化碳培養箱二氧化碳濃度的準確性，國外的細胞株建議用進(jìn)口的細胞培養瓶，比如：orange，corning, falcon品牌的培養瓶。

i.詢(xún)問(wèn)你的代理商或者經(jīng)銷(xiāo)商，接到細胞株后是否需要離心置換出DMSO，因為有些細胞廠(chǎng)家建議不要離心，他們會(huì )認為離心而導致的碎片比DMSO產(chǎn)生毒性的害處更大，如果可以離心，轉速不要過(guò)高，一般都在1000轉以下，此處需要注意，因為有的公司會(huì )拿這一點(diǎn)來(lái)拒絕索賠！

j.培養基的服務(wù)，仔細與供應商確認培養基的品牌及份量，以免供應商以些理由來(lái)推翻你索賠的理由。

k.在細胞株復蘇時(shí)，一定要先想好步驟再做，一步一步來(lái)做，避免導致操作中的污染，復蘇是一個(gè)非常重要的步驟，往往容易導致污染，然后為污染所導致的雜質(zhì)而傷透腦筋。

細胞運輸中，還要注意細胞株的反復凍融情況，有的供應商在供應細胞株或者培養基時(shí)，特別是需要低溫保存的培養基時(shí)，通常會(huì )出現運輸溫度與儲存溫度的差別，而導致培養基或細胞株融掉后又放進(jìn)低溫冰箱進(jìn)行凍存，然后再快遞給我們，特別是血清類(lèi)制品，如果在接到培養基并解凍后，沉淀和絮狀物較多時(shí)，那就要懷疑是否是這種情況！

對于所買(mǎi)回來(lái)的細胞簽別，除了顯微鏡下的形態(tài)學(xué)觀(guān)察，還有就是特異性實(shí)驗，這也是比較重要的！細胞株有些時(shí)候復蘇后剛培養的時(shí)候，老師們發(fā)現從形態(tài)上判斷似乎不是自己所需要的細胞株，于是我就建議他做細胞屬性的特異性實(shí)驗，ATCC的技術(shù)資料最后面附有細胞株的代數，以及細胞株經(jīng)過(guò)了哪些檢測，細胞株特異性實(shí)驗的方法，從而用以確認真正是自己所需要的細胞株！凍存的細胞株，特別是從國外進(jìn)口的細胞株，應該立即復蘇，盡量不要再凍存，反復凍融會(huì )導致細胞株復蘇后的活性低！第一次接種培養時(shí)，應以進(jìn)口的25平方厘米的培養瓶為佳，現在市面上的主要有orange,cornig,BD(Falcon),其中orange價(jià)格比較公道5-6元/個(gè)，BD（Falcon)最貴10元左右每個(gè)，BD的產(chǎn)品一般用于醫院生殖中心實(shí)驗室人工受精卵的一到三代培養！ATCC的細胞株培養基分為完全培養基（原代培養），次培養基（傳代培養基），請大家要注意！

如果細胞運來(lái)后，應該馬上進(jìn)行復蘇，復蘇時(shí)，迅速投入37攝氏度水浴中并不斷振搖，使之迅速融化，離心應在1000轉/分以下，如果太高速會(huì )使本來(lái)脆弱的細胞產(chǎn)生較多的碎片，培養過(guò)程中，甚至會(huì )因為碎片而出現黑點(diǎn)(一般都是800r/min,5min)，棄上清液，以去除二甲基亞砜。加入先前配好的培養基，并在50ml培養瓶中進(jìn)行培養。