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    基因組DNA的分離純化提取方法講解

    [2019/7/31]

    基因組DNA的分離純化提取方法講解

    DNA的提取是分子生物學(xué)研究的基礎技術(shù),提取的DNA的純度及結構完整性是進(jìn)行基因工程各項研究所必需的條件。歸納基因組DNA提取的各個(gè)環(huán)節．

    同時(shí)對DNA提取過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題、原因及應對策略作簡(jiǎn)要的分析綜述。


    實(shí)驗的一般步驟為

    1．破碎細胞.

    2．DNA的提取

    3．DNA的純化

    第一步中破碎細胞常用有三種方法

    ①機械法：主要通過(guò)機械切力的作用使組織細胞破碎的方法。

    本實(shí)驗常用的器械有玻璃勻漿器。將剪碎的組織置于管中，再

    套入研桿來(lái)回研磨，上下移動(dòng)，即可將細胞研碎。勻漿器的研

    缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。此法

    細胞破碎程度較高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織。②化學(xué)法：有些化學(xué)藥品可以改變細胞膜的通透性從而使內合物

    有選擇地滲透出來(lái)。例如某些有機溶劑（如苯、甲苯）、抗生

    素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等。

    實(shí)驗中常用GA緩沖液，GA緩沖液中含有表面活性劑可以打開(kāi)

    細胞的磷脂雙分子層，增加通透性。且GA緩沖液是低滲溶液，細

    胞易吸水漲破，達到更好打開(kāi)細胞的效果。

    特點(diǎn)：作用比較溫和

    存在的問(wèn)題：作用時(shí)間長(cháng)，效率低；化學(xué)試劑毒性較強，同

    時(shí)對產(chǎn)物也有毒害作用，進(jìn)一步分離時(shí)需要用透析等方法除去這

    些試劑。

    ③酶解法：利用各種水解酶，破碎細胞將細胞內含物釋放出來(lái)。

    常用蛋白酶K和十二烷基硫酸鈉(SDS)消化破碎細胞。

    此種方法的特點(diǎn)是：適用范圍廣；作用條件溫和；內含物成分不

    易受到破壞。但其成本高，限制了大規模的利用且耗時(shí)較長(cháng)。

    以上三種破碎細胞的方法可結合使用，使細胞破碎完全，利于接

    下來(lái)的步驟。

    第二步中DNA的提取有兩種方法：

    ①沉淀法

    實(shí)驗常采用異丙醇或無(wú)水乙醇快速提取DNA

    一般經(jīng)典酒精標本DNA提取方法都會(huì )加入蛋白酶K，且在56℃條件下消化3h以上，以達到組織中蛋白質(zhì)的完全消化。

    得到的提取液經(jīng)RNA酶處理，酚、氯仿和異戊醇反復抽提，即可得較純的DNA產(chǎn)物。


    好了，以上就是小編為大家分享的有關(guān)“基因組DNA的分離純化提取方法”的一些信息，希望對各位科研人員有所幫助。


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