稀有細胞檢測，不做無(wú)謂的犧牲

　　有些細胞在血液和組織中的含量很少但卻很重要，比如干細胞、循環(huán)內皮細胞、循環(huán)腫瘤細胞和殘留病變細胞。準確檢測和分析這些稀有細胞，是理解疾病進(jìn)程和發(fā)育機制的關(guān)鍵。然而稀有細胞檢測并不是一件容易的事，會(huì )受到樣本質(zhì)量等多種因素的影響。

　　流式細胞技術(shù)能對每個(gè)細胞進(jìn)行多種定量分析，是在血液、骨髓等組織中檢測稀有細胞的有力工具。稀有細胞檢測往往需要大量樣本才能采集到足夠的數據，這個(gè)時(shí)候傳統流式細胞儀也有些發(fā)怵，因為大樣本意味著(zhù)處理時(shí)間長(cháng)，如果不想犧牲檢測靈敏度，就不能貿然加快進(jìn)樣速率。

　　聲波聚焦技術(shù)，不做任何無(wú)謂的犧牲

　　樣本溶液注射到流式細胞儀的時(shí)候，細胞是隨機分布在三維空間內的。讓這些細胞逐個(gè)穿過(guò)激光束，對于準確采集數據非常重要。絕大多數流式細胞儀通過(guò)快速流動(dòng)的鞘液實(shí)現這一點(diǎn)。鞘液帶動(dòng)細胞并將其限制在中心位置，進(jìn)而建立單細胞流，這一過(guò)程稱(chēng)為水動(dòng)力聚焦。

　　與傳統水動(dòng)力聚焦不同的是，聲波聚焦技術(shù)利用超聲波將細胞緊密聚集在樣本流中間，匯聚成一條直線(xiàn)。這種超聲波大于2 MHz，與醫學(xué)成像中的超聲波類(lèi)似。聲波聚焦流式細胞儀基本不受進(jìn)樣速率的影響，能使細胞強聚焦于激光檢測點(diǎn)，與樣本-鞘液的比率無(wú)關(guān)。

　　不犧牲通量和精度

　　傳統的水動(dòng)力聚焦技術(shù)受到了不少限制。流速提高會(huì )增大樣本流的寬度，使細胞的聚焦效果下降。細胞偏離激光中心越遠，激發(fā)光強度變化就越大，CV值也越高。研究人員經(jīng)常需要在分析通量和精度之間尋求平衡。

　　聲波聚焦技術(shù)在很大程度上與進(jìn)樣流速無(wú)關(guān)，不論樣本流與鞘液流的比例如何，都能使細胞緊密地聚集于激光檢測焦點(diǎn)，避免分散。這樣可以采集更多光子，在極高的樣本通量下保證高精度分析。

　　聲波聚焦流式細胞儀在高達1 mL/min的進(jìn)樣速率下也能維持精確聚焦，讓研究人員能夠獲得更小的CV值，更好地鑒別弱陽(yáng)性信號和背景，實(shí)現更小的差異和更好的信號分離。

　　不犧牲檢測速度稀有細胞檢測一般需要采集大量細胞，才能獲得準確而可靠的結果。在這種情況下，傳統流式細胞儀需要很長(cháng)的處理時(shí)間。不過(guò)，聲波聚焦流式細胞儀的樣本運行速率非�？�(可達1,000μL /min)，每次運行可采集2000萬(wàn)個(gè)細胞。這么高的樣本采集速率和樣本量可以幫助人們快速準確地檢測稀有細胞，不會(huì )影響數據的質(zhì)量。

　　不犧牲珍貴樣本樣本制備對稀有細胞檢測有很大的影響。舉例來(lái)說(shuō)，洗脫和裂解紅細胞(RBC)會(huì )造成嚴重的細胞損失和損傷。聲波聚焦流式細胞儀支持無(wú)洗脫、無(wú)裂解的流式實(shí)驗方案，可以最大程度的保留珍貴樣本，避免不必要的細胞損失，簡(jiǎn)化樣本制備步驟。

　　研究人員可以通過(guò)有目的地稀釋樣本來(lái)取代洗脫和裂解步驟，快速而有效地分析濃度較低的樣本，比如腦脊液(CSF)、干細胞以及細胞數量較少的稀釋樣本。對于小鼠血液、骨髓等難以采集的樣本、細針抽吸樣本或低細胞產(chǎn)量樣本，研究人員可以直接染色和稀釋?zhuān)瑹o(wú)需洗脫或紅細胞裂解。

　　值得一提的是，聲波聚焦流式細胞儀處理全血樣本可省去樣本制備，既沒(méi)有樣本損失，也不會(huì )影響數據質(zhì)量。

　　選擇流式細胞儀需要知道的事

　　近三十年來(lái)，流式細胞儀已經(jīng)成為科研和臨床領(lǐng)域不可或缺的重要工具。不論你是不是第一次購買(mǎi)流式細胞儀，入手一個(gè)新平臺都需要考慮很多因素。為了找到最適合自己的那一款，我們需要了解一些事：

　　流式細胞儀主要由三個(gè)部分組成：液流系統、光學(xué)系統和電子系統。液流系統將顆�；蚣毎�送給激光束進(jìn)行檢測。光學(xué)系統負責照明并將光信號引導到適當的檢測器。而電子系統將光信號轉變?yōu)殡娔X可以處理的電信號。

　　檢測參數同時(shí)檢測多種細胞參數，是流式細胞儀的一大優(yōu)勢。我們在選擇流式細胞儀時(shí)一定要明確自己對參數的需求。因為一次實(shí)驗能檢測多少參數，取決于流式細胞儀配備的激光器和檢測器。比如Attune®NxT聲波聚焦流式細胞儀采用模塊化設計，能夠配置多達4種激光和14色熒光檢測，適用于多參數分析。

　　檢測性能了解流式細胞儀的靈敏度、分辨率、動(dòng)態(tài)范圍、檢測能力和檢測速度，可以幫助我們縮小選擇范圍。購買(mǎi)流式細胞儀是一筆不小的投資，我們不僅需要認清目前的研究需求，還應全面考慮到未來(lái)幾年的應用。

　　樣本類(lèi)型現在絕大多數流式細胞儀都能處理幾微升到幾百微升的樣本。如果細胞非常稀少，我們就需加大樣本量同時(shí)盡量避免細胞損失。在這種情況下，Attune®NxT聲波聚焦流式細胞儀將是不錯的選擇。這種流式細胞儀特別適用于稀少細胞和珍貴樣本的檢測。

　　系統軟件流式細胞儀用起來(lái)順不順手，在很大程度上取決于其系統軟件。除了方便性以外，我們還需要了解軟件是否能呈現我們所需的數據，以及可不可以定時(shí)更新升級。Attune的采集和分析軟件很直觀(guān)而且功能強大，適合各種經(jīng)驗水平的用戶(hù)。

　　實(shí)驗室空間每一個(gè)實(shí)驗室的空間都是有限的，越來(lái)越緊湊正是流式細胞儀的發(fā)展趨勢。Attune聲波聚焦流式細胞儀就是這樣一種小巧方便的臺式設備。

　　除此之外，購買(mǎi)流式細胞儀之前我們還需要了解多方面的信息，比如儀器的自動(dòng)化程度，廠(chǎng)家提供的技術(shù)支持和培訓，儀器的兼容性和可拓展性等等。