樣品制備技術(shù)不過(guò)硬 電鏡儀器再好也沒(méi)用

　　“2015全國生物醫學(xué)農林電鏡技術(shù)研討會(huì )暨生物電鏡前沿技術(shù)培訓班”在浙江大學(xué)舉行。本次會(huì )議特別邀請了國內外知名專(zhuān)家教授和電鏡工作者講授生物電子顯微鏡技術(shù)的最新發(fā)展，交流生物樣品制備和應用方面的技術(shù)經(jīng)驗，并安排部分學(xué)員參加實(shí)驗操作及演示。

　　第二軍醫大學(xué)楊勇驥教授在研討會(huì )上做了題為“常規生物電鏡樣品制備”的報告,介紹了自己對于常規電鏡制樣技術(shù)的理解及應用心得。

　　楊勇驥表示：“電鏡技術(shù)是目前形態(tài)學(xué)分析的最高層次，電鏡的最終目標就是獲得完美的照片�，F今社會(huì )科研競爭十分激烈，生物電鏡技術(shù)是理工醫綜合性最強、精細程度最高的應用技術(shù)之一，是能夠真正體驗到‘細節’決定成敗的一種特殊的技術(shù)方法。而生物電鏡又是一個(gè)不出活的技術(shù)，因此必須要在電鏡工作中刻苦鉆研，才能有所成就�！�

　　楊勇驥強調說(shuō)，要想得到完美的電鏡照片，必須要有過(guò)硬的生物電鏡樣品制備技術(shù)，否則哪怕是采用最高精尖的電鏡也得不到理想的結果。報告中楊勇驥比較了自己實(shí)驗室里一臺使用了30年的電鏡和2009年采購的新型電鏡對同樣的樣品的觀(guān)察結果，結果發(fā)現使用了30年的電鏡由于制樣好，觀(guān)察結果反而更好。

　　生物樣品常規電鏡制樣包括：樣品取材、固定、脫水、浸透、包埋、修快、定位、超薄切片、電子染色等步驟。楊勇驥指出這么多環(huán)節，任何一個(gè)環(huán)節出現一點(diǎn)問(wèn)題，整個(gè)制樣就失敗了。報告中他詳細的介紹了各個(gè)環(huán)節應該注意的要點(diǎn)，以及易犯的錯誤。

　　從楊勇驥的介紹中，我們體會(huì )到了生物電鏡制樣的要求是多么精細。就單拿超薄切片這一個(gè)步驟來(lái)說(shuō)，要想獲得理想的切片效果，首先在切片時(shí)一定要有良好的心境，甚至要在自己心情比較好的時(shí)候才能來(lái)做這項工作。另外切片時(shí)要確保沒(méi)有人打擾，還要避免對切片機大聲咳嗽、打噴嚏等。切片的環(huán)境不能過(guò)于潮濕，否則會(huì )引起震顫。要選擇合適的切片速度。撈片時(shí)要選擇潔凈的、未氧化的、親水性良好的載網(wǎng)才能撈起完整的切片，所用載網(wǎng)如果放了幾天，已經(jīng)被氧化，就不要用來(lái)?yè)破�了，同時(shí)注意用載網(wǎng)的正面撈片。另外，還有確保玻璃刀或鉆石刀的刀口平整。

　　最終理想的超薄切片應該是厚薄均一、無(wú)空洞、無(wú)震顫、無(wú)皺褶、無(wú)雜質(zhì)污染的連續切片，而且除了切片這個(gè)環(huán)節，前期的取材、脫水、浸透、包埋、修快、定位與后期的染色等對切片效果的影響是環(huán)環(huán)相扣。

　　最后，楊勇驥說(shuō)道：“生物電鏡制樣技術(shù)是生物醫學(xué)技術(shù)中最精細、最繁復的技術(shù)之一。生物電鏡工作者沒(méi)有教授與技術(shù)員之分，只有不斷實(shí)踐摸索技術(shù)，精心總結經(jīng)驗，才能掌握這門(mén)技術(shù)的精髓，才能配合使用電鏡獲得理想精美的超微結構圖像�！�