北大魏文勝開(kāi)發(fā)出新型CRISPR/Cas 9 sgRNA文庫

　　日前，來(lái)自北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院的魏文勝(Wensheng Wei)研究員和同事們在《自然》雜志上報告稱(chēng)，他們開(kāi)發(fā)出了一個(gè)新型的 CRISPR/Cas 9 sgRNA 文庫，并提出了一種基于 sgRNA 文庫功能篩查和高通量測序分析的基因鑒別新方法。

　　近年來(lái)基因組編輯領(lǐng)域取得飛速的發(fā)展， ZFNs 、 TALEN s、 CRISPR/Cas 三大利器大大改變了科研人員在哺乳動(dòng)物系統中研究基因及其功能的方式。CRISPR/Cas 系統最初被發(fā)現是細菌和古細菌為抵御病毒和質(zhì)粒不斷攻擊而演化來(lái)的一種獲得性免疫防御機制。在 II 型 CRISPR/Cas 系統中，Cas9 內切酶家族在單導向 RNA (single-guide RNA，sgRNA)引導下靶向和剪切外源基因，生成 DNA 雙鏈斷裂(DSBs)。 CRISPR/Cas 系統系統的高效基因組編輯功能已被應用于多種生物，包括人、小鼠、大鼠、斑馬魚(yú)、秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)、植物及細菌。相比于 ZFNs 和 TALEN，CRISPR/Cas 系統介導的基因組靶向實(shí)驗在真核細胞中具有相似甚至更高的效率。

　　在這項最新研究中，魏文勝等人利用一種有效的方法構建出了一種新型的 CRISPR/Cas 9 sgRNA 文庫。利用文庫功能篩查結合高通量測序分析，他們成功地鑒別出了對于炭疽和白喉毒素毒性至關(guān)重要的宿主基因，并在隨后的細胞實(shí)驗中對這些候選基因進(jìn)行了進(jìn)一步的功能驗證。

　　盡管利用 RNAi 文庫進(jìn)行芯片篩查和混合篩查已被廣泛應用于哺乳動(dòng)物細胞系統遺傳分析，它們受到一些局限，尤其是 RNAi 下調特異的基因往往不足以引起目的表型改變。因此，已基因敲除篩查為基礎的方法受到人們的高度關(guān)注。

　　研究人員表示，他們所開(kāi)發(fā)的這種基于 CRISPR 的策略結合深度深度分析適用于功能基因組學(xué)研究。廣泛地利用這一強有力的遺傳篩查策略將進(jìn)一步地推動(dòng)以一種高通量的方式應用 CRISPR/Cas 系統開(kāi)展基因功能研究，其不僅能夠快速地鑒別對細菌毒性至關(guān)重要的基因，還將促成發(fā)現參與其他生物過(guò)程的基因。