分光光度計的原理及使用注意事項

分光光度計是實(shí)驗室常規分析設備，主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。它利用光譜分析方法對樣品進(jìn)行定性、定量分析，在現代分子生物實(shí)驗室中常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量等。分光光度計又稱(chēng)光譜儀(spectrometer)，是采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源，光源透過(guò)測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。測量范圍一般包括波長(cháng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能�？梢远�量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(cháng)260 nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸，事先要選擇對應的系數。

蛋白質(zhì)的直接定量（UV法）
這種方法是在280nm波長(cháng)直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。該方法適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來(lái)說(shuō)，速度快，操作簡(jiǎn)單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。

比色法蛋白質(zhì)定量
比色法測定的基礎是蛋白質(zhì)構成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨
基酸數目直接相關(guān)，從而反應蛋白質(zhì)濃度。比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。

細菌細胞密度（OD 600）
OD600是追蹤液體培養物中微生物生長(cháng)的標準方法。以未加菌液的培養液作為空白液，之后定量培養后的含菌培養液。為了保證正確操作，必須針對每種微生物和每臺儀器用顯微鏡進(jìn)行細胞計數，做出校正曲線(xiàn)。需要注意的是，測試的樣品不能離心，保持細菌懸浮狀態(tài)。

分光光度計屬于精密儀器，應當妥善保管和精心維護，這樣才能保證分光光度計長(cháng)期使用、長(cháng)期的穩定可靠、測量精度高。

分光光度計使用注意事項
1. 使用儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查。
2. 指針式儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須位于零刻度上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調零。
3. 儀器在制造廠(chǎng)原包裝條件下，應儲存在環(huán)境溫度為5℃~35℃，濕度不超過(guò)85%的室內，且在空氣中不應有足以引起腐蝕的有害物質(zhì)。
4. 儀器工作環(huán)境應在在干燥的房間內，使用時(shí)放置在堅固平穩的工作臺上，室內照明不宜太強。
5. 比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
6. 比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結果失去意義。
7. 鑒于儀器在出廠(chǎng)之前已經(jīng)調試到最佳狀態(tài)，所以用戶(hù)不能擅自調整，更不能擅自打開(kāi)機殼拆卸其中的零件（更換光源燈除外），尤其是拆卸單色器、不能碰傷或擦拭光學(xué)原件鏡面。
8. 如有故障急需自修，應在廠(chǎng)方技術(shù)人員同意指導下，請具有相應資質(zhì)的專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行檢查、調整和維修，建議返修。

美譜達在光度計的方法學(xué)應用、產(chǎn)品機械結構、光學(xué)設計、電氣應用和軟件開(kāi)發(fā)等方面不斷開(kāi)拓創(chuàng )新，相繼推出UV/Vis-1系列紫外/可見(jiàn)分光光度計，UV-3系列掃描型紫外/可見(jiàn)分光光度計，UV-6系列雙光束掃描型紫外/可見(jiàn)分光光度計，以滿(mǎn)足各類(lèi)實(shí)驗室對分光光度計產(chǎn)品的不同需求，受到國內外用戶(hù)的普遍好評。