微生物實(shí)驗常用的36種培養基的配制說(shuō)明

1.牛肉膏蛋白胨培養基（用于細菌培養）

牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。

2.高氏1號培養基(用于放線(xiàn)菌培養)

可溶性淀粉20g，KNO₃ 1g，NaCl 0.5g，K₂HPO₄•3H₂O 0.5g，MgSO₄•7H₂O0.5g，FeSO₄•7H₂O0.01g，水1000mL，pH7.4～7.6。配制時(shí)注意：可溶性淀粉要先用冷水調勻后再加入到以上培養基中。

3.馬丁氏（Martin）培養基（用于從土壤中分離真菌）

K₂HPO₄1g，MgSO₄•7H₂O0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，1/3000孟加拉紅水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃濕熱滅菌30min。待培養基融化后冷卻55～60℃時(shí)加入鏈霉素(鏈霉素含量為30μg/mL)。

4.馬鈴薯培養基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養)

馬鈴薯(去皮)200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下：

將馬鈴署去皮，切成約2cm²的小塊，放入1500mL的燒杯中煮沸30min，注意用玻棒攪拌以防糊底，然后用雙層紗布過(guò)濾，取其濾液加糖，再補足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

5.察氏培養基(蔗糖硝酸鈉培養基)(用于霉菌培養)

蔗糖30g，NaNO₃ 2g，K₂HPO₄ 1g，MgSO₄•7H₂O0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄•7H₂O0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。

6.Hayflik培養基(用于支原體培養)

牛心消化液(或浸出液)1000mL，蛋白胨10g，NaCl 5g，瓊脂15g，pH7.8～8.0，分裝每瓶70mL，121℃濕熱滅菌15min，待冷卻至80℃左右，每70mL中加入馬血清20mL，25%鮮酵母浸出液10mL，15醋酸鉈水溶液2.5mL，青霉素G鉀鹽水溶液(20萬(wàn)單位以上)0.5mL，以上混合后傾注平板。

*注意：醋酸鉈是極毒的藥品，需特別注意安全操作。

7.麥氏(McCLary)培養基(醋酸鈉培養基)

葡萄糖0.1g, KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸鈉0.82g，瓊脂l.5g，蒸餾水l00mL。溶解后分裝試管，1l5℃濕熱滅菌15min。

8.葡萄糖蛋白胨水培養基(用于V.P.反應和甲基紅試驗)

蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K₂HPO₄ 0.2g，水100mL，pH7.2，1l5℃濕熱滅菌20min。

9.蛋白胨水培養基(用于吲哚試驗)

蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.2～7.4，121℃濕熱滅菌20min。

10.糖發(fā)酵培養基(用于細菌糖發(fā)酵試驗)

蛋白胨0.2g，NaCl 0.5g，K₂HPO₄ 0.02g，水100mL，溴麝香草酚藍(1%水溶液)0.3mL，糖類(lèi)lg。分別稱(chēng)取蛋白胨和NaCl溶于熱水中，調pH至7.4，再加入溴麝香草酚藍(先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)，加入糖類(lèi)，分裝試管，裝量4～5cm高，并倒放入一杜氏小管(管口向下，管內充滿(mǎn)培養液)。115℃濕熱滅菌20min。滅菌時(shí)注意適當延長(cháng)煮沸時(shí)間，盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內不殘存氣泡。常用的糖類(lèi)，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等(后兩種糖的用量常加大為1.5%)。

11.RCM培養基(強化梭菌培養基)、(用于厭氧菌培養)

酵母膏3g，牛肉膏l0g，蛋白胨10g，可溶性淀粉lg，葡萄糖5g, 半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，NaCl 3g，NaAc 3g，水l000mL，pH8.5，刃天青3mg/L，l2l℃濕熱滅菌30min。

12.TYA培養基(用于厭氧菌培養)

葡萄糖40g，牛肉膏2g，酵母膏2g，胰蛋白胨(bacto-typetone)6g，醋酸銨3g，KH₂PO₄ 0.5g，MgSO₄•7H₂O0.2g，FeSO₄•7H₂O0.01g，水1000mL， pH6.5，121℃濕熱滅菌30min。

13.玉米醪培養基(用于厭氧菌培養)

玉米粉65g，自來(lái)水1000mL，混勻，煮10min成糊狀，自然pH，121℃濕熱滅菌30min。

14.中性紅培養基(用于厭氧菌培養)

葡萄糖40g，胰蛋白胨6g，酵母膏2g，牛肉膏2g，醋酸銨3g，KH₂PO₄ 5g，中性紅0.2g，MgSO₄•7H₂O0.2g，FeSO₄•7H₂O0.01g, 水1000mL，pH6.2，121℃濕熱滅菌30min。

15.CaCO₃明膠麥芽汁培養基(用于厭氧菌培養)

麥芽汁(6波美)1000mL，水1000mL，CaCO₃10g，明膠10g，pH6.8,121℃濕熱滅菌30min。

16.BCG牛乳培養基(用于乳酸發(fā)酵)

(A)溶液：

脫脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚綠(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃滅菌20min。

(B)溶液：

酵母膏10g，水500mL，瓊脂20g, pH6.8,121℃濕熱滅菌20min。以無(wú)菌操作趁熱將(A)、(B)溶液混合均勻后倒平板。

17.乳酸菌培養基(用于乳酸發(fā)酵)

牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，乳糖5g，NaCl 5g，水1000mL，pH6.8，121℃濕熱滅菌20min。

18.酒精發(fā)酵培養基(用于酒精發(fā)酵)

蔗糖10g,MgSO₄•7H₂O0.5g,NH₄NO₃0.5g,20%豆芽汁2mL，KH₂PO₄ 0.5g，水100mL，自然pH。

19.柯索夫培養基(用于鉤端螺旋體培養)

優(yōu)質(zhì)蛋白胨0.4g, NaCl0.7g,KCl 0.02g, NaHCO₃ 0.01g，CaCl 0.02g，KH₂PO₄0.09g，NaH₂PO₄0.48g，蒸餾水500mL，無(wú)菌兔血清40mL。

制法：

除兔血清外的其余各成分混合，加熱溶解，調pH至7.2，121℃濕熱滅菌20min，待冷卻后，加入無(wú)菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分裝試管（5～10mL/管），56℃水浴滅活lh后備用。

20.豆芽汁培養基

黃豆芽500g，加水1000mL，煮沸lh，過(guò)濾后補足水分，121℃濕熱滅菌后存放備用，此即為50%的豆芽汁；
用于細菌培養：

10%豆芽汁200mL，葡萄糖(或蔗糖)50g，水800mL，pH7.2～7.4。
用于霉菌或酵母菌培養：

10%豆芽汁200mL，糖50g，水800mL，自然pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

21.LB(Luria—Bertani)培養基(細菌培養，常在分子生物學(xué)中應用)

雙蒸餾水950mL，胰蛋白胨l0g，NaCl l0g，酵母提取物(bacto- yeast extract)5g，用lmol/L NaOH (約l mL) 調節pH值至7.0，加雙蒸餾水至總體積為1L，121℃濕熱滅菌30min。

含氨芐青霉素LB培養基：

待LB培養基滅菌后冷至50℃左右加入抗生素，至終濃度為80～100mg/L。
22.復紅亞硫酸鈉培養基(遠藤氏培養基)、(用于水體中大腸菌群測定)蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g，瓊脂20g，乳糖10g，K₂HPO₄0.5g，無(wú)水亞硫酸鈉5g，5%堿性復紅乙醇溶液20mL，蒸餾水1000mL。

制作過(guò)程：

先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中，加熱溶解，再加入K₂PO₄，溶解后補充水至l000mL，調pH至7.2～7.4。隨后加入乳糖，混勻溶解后，于115℃濕熱滅菌20min。再稱(chēng)取亞硫酸鈉至一無(wú)菌空試管中，用少許無(wú)菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min后，立即滴加于20mL5%堿性復紅乙醇溶液中，直至深紅色轉變?yōu)榈�粉紅色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)的培養基中，混勻后立即倒平板，待凝固后存放冰箱備用，若顏色由淡紅變?yōu)樯罴t，則不能再用。

23.乳糖蛋白胨半固體培養基(用于水體中大腸菌群測定)

蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，酵母膏5g，乳糖10g，瓊脂5g，蒸餾水1000mL，pH7.2～7.4，分裝試管(l0mL/管)，115℃濕熱滅菌20min。

24.乳糖蛋白胨培養液(用于多管發(fā)酵法檢測水體中大腸菌群)

蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，蒸餾水l000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。調pH至7.2，分裝試管(l0mL/管)，并放入倒置杜氏小管，l15℃濕熱滅菌20min。

25.三倍濃乳糖蛋白胨培養液(用于水體中大腸菌群測定)

將乳糖蛋白胨培養液中各營(yíng)養成分以擴大3倍加入到l000mL水中，制法同上，分裝于放有倒置杜氏小管的試管中，每管5mL，1l5℃濕熱滅菌20min。

26.伊紅美藍培養基(EMB培養基)(用于水體中大腸菌群測定和細菌轉導)

蛋白胨l0g，乳糖10g，K₂HPO₄ 2g，瓊脂25g，2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL,0.5%美藍(亞甲藍)水溶液l3mL，pH7.4。

制作過(guò)程：

先將蛋白胨、乳糖、K₂HPO₄和瓊脂混勻，加熱溶解后，調pH至7.4，1l5℃濕熱滅菌20min，然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍液，充分混勻，防止產(chǎn)生氣泡。待培養基冷卻到50℃左右倒平皿。如培養基太熱會(huì )產(chǎn)生過(guò)多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細菌轉導實(shí)驗中用半乳糖代替乳糖，其余成分不變。

27.加倍肉湯培養基(用于細菌轉導)

牛肉膏6g，蛋白胨20g，NaCl 10g，水1000mL，pH7.4～7.6。
28.半固體素瓊脂(用于細菌轉導)瓊脂1g，水100mL，121℃濕熱滅菌30min。

29.豆餅斜面培養基(用于產(chǎn)蛋白酶霉菌菌株篩選)

豆餅100g加水5～6倍，煮出濾汁100mL，汁內加入KH₂PO₄ 0.1%，MgSO₄ 0.05%,(NH₄)₂SO₄  0.05%，可溶性淀粉2%，pH6，瓊脂2%～2.5%。  

30.酪素培養基(用于蛋白酶菌株篩選)

分別配制A液和B液。
A液：

稱(chēng)取Na₂HPO₄•7H₂O1.07g。干酪素4g，加適量蒸餾水，并加熱溶解。
B液：

稱(chēng)取 KH₂PO₄ 0.36g，加水溶解。A、B液混合后，加入酪素水解液0.3 mL，加瓊脂20g，最后用蒸餾水定容至1000mL。

酪素水解液的配制：

1g酪蛋白溶于堿性緩沖液中，加入1%的枯草芽孢桿菌蛋白酶25mL加水至100mL，30℃水解l h。用于配制培養基時(shí)，其用量為1000mL，培養基中加入100mL以上水解液。

31.細菌基本培養基(用于篩選營(yíng)養缺陷型)   

Na₂HPO₄•7H₂O1g，MgSO₄•7H₂O0.2g，葡萄糖5g，NaCl 5g，K₂HPO₄lg，水l000mL，pH7.0，1l5℃濕熱滅菌30min。

32.YEPD培養基(用于酵母原生質(zhì)體融合)

酵母粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL，pH6.0，115℃濕熱滅菌20min。

33.YEPD高滲培養基(用于酵母原生質(zhì)體融合)

在YEPD培養基中加入0.6mol/L的NaCL，3%瓊脂。

34.YNB基本培養基(用于酵母原生質(zhì)體融合)

0.67%酵母氮堿基(YNB, 不含氨基酸，Difco),2%葡萄糖，3%瓊脂，pH6.2。

另一配方為：

葡萄糖10g(NH₄)₂SO₄ 1g，K₂HPO₄0.125g，KHPO₄ 0.875g，KI 0.0001g，MgSO₄•7H₂O0.5g，CaCl₂•2H₂O0.lg，NaCl0.1g，維量元素母液lmL，維生素母液lmL(母液均按常規配制)，水1000mL，pH5.8～6.0。

35.YNB高滲基本培養基(用于原生質(zhì)體融合)

在YNB基本培養基中加入0.6mol/LNaCl。

36.酚紅半固體柱狀培養基(用于檢查氧與菌生長(cháng)的關(guān)系)

蛋白胨1g，葡萄糖10g, 玉米漿10g，瓊脂7g，水1000mL，pH7.2。在調好pH后，加入1.6%酚紅溶液數滴，至培養基變?yōu)樯罴t色，分裝于大試管中，裝量約為試管高度的1/2，1l5℃滅菌20min。細菌在此培養基中利用葡萄糖生長(cháng)產(chǎn)酸，使酚紅從紅色變成黃色，在不同部位生長(cháng)的細菌，可使培養基的相應部位顏色改變,但注意培養時(shí)間太長(cháng)，酸可擴散以致不能正確判斷結果。
以上各種培養基均可配制成固體或半固體狀態(tài)，只需改變瓊脂用量即可，前者為1.5%～2.0%，后者為0.3%～0.8%。