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實(shí)驗室儀器
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影響種子罐培養的主要因素介紹
[2017/4/14]
影響種子罐培養主要因素包括:營(yíng)養條件,培養條件,染菌控制,擴培級數確定以及接種量的確定。
1培養基
培養基關(guān)系營(yíng)養的獲取,對微生物的生長(cháng)、繁殖、酶活性與產(chǎn)量均有直接影響。培養基可分為C/N基礎生長(cháng)營(yíng)養,無(wú)機鹽滲透壓控制,微量元素維系組成,以及pH酶活性調節系統。
培養基的要求以組成簡(jiǎn)單,來(lái)源豐富,價(jià)格便宜,取材方便為宜。
注:
A種子罐最后一級當與生產(chǎn)罐一致,此時(shí)前罐已建立發(fā)酵所需酶系,新環(huán)境條件下不需要重新構建;
B種子罐培養基應當增加N用量,且無(wú)機氮的增量比例要大一些;
C菌種進(jìn)級之后由于設備差異(罐型、攪拌形式、轉速等),培養基配比需要重新根據實(shí)驗調整
2種齡、接種量
種齡要求:對數生長(cháng)期移種,這是因為嫩種和老種轉罐后啟動(dòng)速度均較慢,會(huì )導致發(fā)酵周期增加且產(chǎn)量低。
接種量:接種量影響新環(huán)境下的遲滯期長(cháng)短,這是因為接種量伴隨細胞分裂繁殖所需的RNA等代謝物,此類(lèi)物質(zhì)含量多可快速進(jìn)入對數生長(cháng)期,故接種量與新環(huán)境下的遲滯期成反比。
3溫度
前期看溫度,后期看溶氧。
任何微生物都有其最適溫度范圍,如下
生物學(xué)范圍內,每升高10℃,微生物生長(cháng)速度可提升一倍,溫度直接影響細胞代謝酶系。
在最適范圍之內,提高對數生長(cháng)期的前期的溫度有利于菌體的合成,對數生長(cháng)期后期溶解氧對菌體合成速率影響更大,此時(shí)需要提升通氣量及攪拌等。
4 pH影響
陰離子(醋酸根,磷酸根)被吸收或氮源被利用后產(chǎn)NH3,使pH升;
陽(yáng)離子(NH4+,K+)被吸收或有機酸積累使pH降;
高C培養基pH往低pH移動(dòng);
高N培養基pH往高pH移動(dòng)。
調節pH三種方式:a酸堿溶液;b緩沖液;c緩沖劑(酸性或堿性鹽)
5通氣攪拌
通氣量、罐壓、攪拌共同決定了當前的溶氧狀態(tài),只有當溶解氧大于當前的BOD時(shí),今天才能正常生長(cháng),移種之后菌體進(jìn)入對數生長(cháng)期,分裂繁殖速率指數增長(cháng),當此時(shí)應當交替調節通氣量和攪拌功率,以使DO達到菌體所需標準,一旦無(wú)法滿(mǎn)足菌體可適當降溫,降低菌體耗氧速率,此時(shí)菌體分裂生長(cháng)效率降低但不至于缺氧畸形或自溶。
6種子罐級數確定
技術(shù)越少,越不易染菌,級數由菌種性質(zhì)確定,如生長(cháng)速率,對數期菌體濃度,孢子的發(fā)育水平等,在不斷的優(yōu)化調試之后,應當盡可能減少擴培種子罐級數,但需以不影響或較少影響生產(chǎn)罐遲滯期的增加及對數生長(cháng)期生長(cháng)速率為前提。