原代細胞培養中的6個(gè)常見(jiàn)錯誤

當培養原代細胞時(shí)，重要的是要記住，他們不是細胞系，不能同等對待。因為ScienCell在原代細胞培養方面的廣泛工作，我們非常熟悉研究人員在培養原代細胞時(shí)遇到的常見(jiàn)問(wèn)題。這里有六個(gè)在原代細胞培養中的常見(jiàn)錯誤，以及如何糾正這些錯誤。
 
錯誤＃1：一小管原代細胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正＃1：原代細胞對解凍過(guò)程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無(wú)菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養箱中。
 
錯誤＃2：解凍小瓶后直接離心原代細胞

糾正＃2：我們不建議在解凍后離心細胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復原代細胞后的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO。
 
錯誤＃3：允許原代細胞變得過(guò)于融合

糾正＃3：當生長(cháng)至100％匯合時(shí)，原代細胞可以變得衰老。記住，原代細胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細胞的生長(cháng)。我們建議在細胞達到90-95％融合時(shí)，對原代細胞進(jìn)行傳代培養。
       
錯誤＃4：傳代原代細胞時(shí)過(guò)度胰蛋白酶消化

糾正＃4：當細胞傳代時(shí)，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。我們特別推薦專(zhuān)門(mén)為原代細胞配制的胰蛋白酶中和溶液（Cat＃0113），但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制劑（Cat＃0173）。
 
錯誤＃5：原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正＃5：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進(jìn)細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。
 
錯誤6：原代細胞可以無(wú)限的增殖

糾正＃6：與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進(jìn)行實(shí)驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細胞類(lèi)型，你應該密切監測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著(zhù)時(shí)間的推移，大量生長(cháng)從而成為主要細胞。
 
在培養原代細胞時(shí)，記住這六個(gè)技術(shù)提示是非常重要的。最終，如果你認真、仔細的對待你的細胞，它們也會(huì )更好地為你的實(shí)驗服務(wù)。