如何知道你的細胞快樂(lè )嗎？——細胞培養注意事項

科研同學(xué)養細胞，
都把細胞當成自己的娃，
娃生活地怎么樣，心情好不好，
快不快樂(lè )，是每天都要關(guān)注的事情。
因為擔心一不留神，
細胞娃就生存地不好，
甚至于受到污染，細胞 over 了！
如何讓細胞快樂(lè )，我們一起往下看！
 
1. 確保所有實(shí)驗室材料都無(wú)菌
交叉污染是細胞培養的大敵。即使是最輕微的污染，也可能毀了幾個(gè)星期的成果。因培養箱內溫暖潮濕，真菌極易生長(cháng)，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前，應用酒精擦拭干凈，以避免污染。

2. 小心處理您的培養物
細胞培養的脆弱性怎么強調也不為過(guò)。劇烈搖晃，或連續的溫度波動(dòng)可能會(huì )對生長(cháng)產(chǎn)生不利的影響。確保培養箱是水平的，溫度均一，且遠離電動(dòng)儀器。此外，盡量避免一次處理多個(gè)細胞系，因為它可能會(huì )影響細胞的基因型和表型。您還應定期完成 STR 圖譜分析，以確認細胞系的身份。

3. 在使用前正確解凍細胞
盡管解凍看起來(lái)是個(gè)簡(jiǎn)單的步驟，但必須操作得當，以免傷害細胞。長(cháng)時(shí)間暴露在高溫條件下會(huì )使細胞無(wú)法鋪板。因此，凍存管應當在 37°C 水浴中放置 2 分鐘，然后用條件培養基稀釋?zhuān)�以避�?DMSO 造成直接傷害。

4. 使用對數生長(cháng)期的細胞
細胞培養過(guò)程共有 3 個(gè)階段：停滯期、對數期和平臺期，分別代表了低細胞生長(cháng)、高細胞生長(cháng)和無(wú)細胞生長(cháng)。最有活力的細胞是健康的，快速分裂的，在對數期以 70-80% 的匯合度存在。

5. 在傳代之前不要讓細胞完全匯合
匯合度是指貼壁細胞占據培養瓶表面積的比例。完全匯合意味著(zhù) 100% 的表面都被貼壁細胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài)，因為它意味著(zhù)細胞不能繼續生長(cháng)。不過(guò)，當務(wù)之急是使用活躍生長(cháng)的細胞。

6. 選擇最佳的培養基開(kāi)發(fā)策略
在細胞培養過(guò)程中，培養基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的最重要因素。必須針對每種培養物來(lái)定制培養基，以?xún)?yōu)化實(shí)驗結果。在決定以哪種方式來(lái)開(kāi)發(fā)您的培養基時(shí)，您有幾個(gè)選擇。您可以購買(mǎi)現成的，自己開(kāi)發(fā)，也可以與另一家公司合作開(kāi)發(fā)特定的培養基。在這個(gè)過(guò)程中，您需要考慮時(shí)間和成本等因素。

7. 配制干粉培養基時(shí)評估水的質(zhì)量
液體培養基往往會(huì )帶來(lái)比干粉培養基更高質(zhì)量的結果。這可能與水的質(zhì)量有關(guān)。由于細菌在水中迅速生長(cháng)，故需要監控內毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來(lái)監控和控制細菌生長(cháng)，比如過(guò)濾器。因此使用商業(yè)化生產(chǎn)的液體培養基會(huì )更加可靠一點(diǎn)。

8. 利用細胞的代謝特性來(lái)優(yōu)化培養基
分析使用過(guò)的培養基，有助于鑒定必要成分的代謝速率，包括氨基酸和維生素。從細胞生長(cháng)階段和蛋白生產(chǎn)階段收集到的動(dòng)態(tài)代謝圖譜可用來(lái)平衡基礎培養基和添加培養基，指導培養基的重點(diǎn)，有助于蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。

9. 避免細胞的過(guò)度消化
胰蛋白酶通過(guò)消化負責讓細胞與容器結合的蛋白質(zhì)，而實(shí)現貼壁細胞的傳代。如果細胞暴露在胰酶中時(shí)間太長(cháng)，則胰酶將開(kāi)始切割細胞表面蛋白，這會(huì )影響細胞行駛正常功能的能力。

10. 培養基中不要一直使用抗生素
隨著(zhù)細胞培養物更加頻繁地暴露在抗生素中，對抗生素有著(zhù)天然耐藥性的菌株將開(kāi)始出現。這種現象可掩蓋潛在的污染。