無(wú)菌接種操作步奏

無(wú)菌操作環(huán)節

（1）接種室應保持清潔，用煤粉酚皂液擦洗臺面及墻壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均應用紫外燈滅菌。定期對接種室作無(wú)菌程度的檢查。

（2）進(jìn)入接種室前，應先做好個(gè)人衛生工作，在緩沖間內要更換工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只準在接種室內使用。不準穿到其它地方去，并要定期更換、消毒。

（3）接種的試管、三角并瓶等應做好標記，注明培養基、菌種的名稱(chēng)、日期。移入接種室內的所有物品，均須在緩沖室用70%酒精擦試干凈。

（4）接種前，雙手用70%酒精或新潔爾消毒，操作過(guò)程不離開(kāi)酒精燈火焰；棉塞不亂放；接種工具使用前后均需火焰滅菌。

（5）培養箱應經(jīng)常清潔消毒。

接種室的消毒方法

1、紫外線(xiàn)滅菌接種室使用前打開(kāi)紫外燈照射約30分鐘，就能使空氣和室壁表面基本上無(wú)菌。為了加強滅菌效果，在開(kāi)燈以前可以在接種內噴灑石炭酸溶液，使空氣中附有微生物的塵埃降落，并殺死一些微生物。接種室的臺面等，可以用2-3%的來(lái)蘇爾擦洗。紫外線(xiàn)對人體皮膚，尤其對眼睛具有殺傷力，因皮不要直視開(kāi)著(zhù)的紫外燈，也不能在開(kāi)著(zhù)燈的情況下工作。

2、噴灑石炭酸將石炭酸水浴，稍熱，使之溶解。用吸耳球通過(guò)吸管吸取該溶液，配成5%溶液。對于小房間，可用噴霧器由上至下、由里至外順序進(jìn)行噴霧，并門(mén)，稍等片刻即可使用。石炭酸對皮膚有較強的毒害作用，使用時(shí)不要接觸皮膚。

3、福爾馬林熏蒸

（1）用量：市售福爾馬林是37-40%的甲醛水溶液。常用量按每立方空間2-6ml計算。

（2）熏蒸方法：用福爾馬林熏蒸有兩種方法：

①加熱熏蒸：按熏蒸空間計算,量取甲醛溶液,放在酒精燈上方的小鐵筒或燒杯中,點(diǎn)燃酒精燈,關(guān)閉室門(mén)。酒精燈最好在甲醛蒸完后即自行熄滅。

②氧化熏蒸：在一瓷杯里鋪一張報紙，放入高猛酸鉀（其用量為1/2甲醛量），再取定量的甲醛溶液，倒在盛有高猛酸鉀的容器里，立即關(guān)門(mén)。幾秒鐘后，由高猛酸鉀氧化甲醛反應所產(chǎn)生的熱將其余的甲醛蒸為氣體。由于甲醛對人眼、鼻有強烈的刺激作用，熏蒸后相當時(shí)間內不能進(jìn)入室內工作。因此，接種室至少在使用前24小時(shí)進(jìn)行熏蒸，房間應密閉，保持12小時(shí)。之后可取與甲醛等更是的氨水，倒在一個(gè)瓷碗里，放入熏蒸過(guò)的接種室，以減少甲醛對人的刺激作用。用氨水中和，至少應在工作前2小時(shí)進(jìn)行。

4、過(guò)濾除菌近幾年來(lái)，多采用一種稱(chēng)之為超凈工作臺的接種室，其原理是借助于一鼓風(fēng)機將普通空氣鼓入，通過(guò)粗濾、超濾纖維過(guò)濾后，進(jìn)入工作臺內的空氣即為無(wú)菌空氣。整個(gè)工作室內要求清潔無(wú)塵，這樣可延長(cháng)超凈工作臺的使用壽命。新的超凈工作臺使用前，要進(jìn)行無(wú)菌試驗，確定合格方可使用，接種前，應先將工作臺開(kāi)啟5-6分鐘。 接種室無(wú)菌程度檢查取無(wú)菌的營(yíng)養瓊脂平板，在接種室內臺上和臺下各放一套，把皿蓋打開(kāi)15min，然后蓋好，倒置37℃恒溫培養24-28小時(shí)，如果每個(gè)皿內菌落不超過(guò)4個(gè)，則可以認為無(wú)菌程度良好，若菌落很多，則應對接種室進(jìn)一步滅菌。