紫外分光光度計組成部件以及測定步驟

　　一、紫外分光光度計作用和組成部件
　　許多有機化合物在紫外區具有特征的吸收光譜，因此可用紫外分光光度法對有機物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結構分析及定量測定．紫外分光光度法定量測定的依據是比耳定律。首先確定化合物的紫外吸收光譜，確定最大吸收波長(cháng)。在選定的波長(cháng)下，作出化合物溶液的工作曲線(xiàn)，根據在相同條件下測得待測液的吸光度值來(lái)確定待測液中化合物的含量。凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長(cháng)處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定�？梢�(jiàn)-紫外分光光度計。其應用波長(cháng)范圍為200～400nm的紫外光區、400～850nm的可見(jiàn)光區。紫外分光光度計主要由輻射源（光源）、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。

　　二、手動(dòng)紫外分光光度計與自動(dòng)紫外分光光度計的區別
　　手動(dòng)紫外分光光度計是帶刻度盤(pán)顯示波長(cháng)的，只能用手動(dòng)調節波長(cháng)大小。
　　自動(dòng)紫外分光光度計是LCD或LED顯示波長(cháng)的，通過(guò)設置鍵選擇需要的波長(cháng)，再有馬達傳動(dòng)走到設置的波長(cháng)。

　　三、紫外分光光度計測定樣品步驟
　　1、首先，知道所需要測量物質(zhì)的特征吸收波長(cháng)是多少，這個(gè)可在國家標準、行業(yè)標準或其他相關(guān)標準或方法。例如測量總氮的話(huà)，就需要220和275nm這2個(gè)波長(cháng)，所以必須買(mǎi)紫外的光度計，并且最好帶雙波長(cháng)測定功能，例如測總磷是697nm，只需買(mǎi)臺可見(jiàn)光度計就可以了。
　　2、第二步：知道所測量的物質(zhì)的實(shí)驗方法，需要哪些儀器和設備，還有玻璃器皿等，同時(shí)還有比較完成測量所需要的所有化學(xué)試劑等。這個(gè)可以在標準或實(shí)驗方法中找到，基本在互聯(lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測量方法。
　　3、第三步：配置好所需測量物質(zhì)的標準濃度溶液，一般是5~8個(gè)標準溶液，濃度建議從高到低，建議每個(gè)不同濃度貼上標簽，以防順序搞錯。注意，部分實(shí)驗需要往標準溶液中加顯色劑之后才可以用光度計進(jìn)行測量。
　　4、第四步：設置好光度計的測量波長(cháng)，這就需要熟悉光度計的基本操作，一般測量物質(zhì)的濃度都是用的標準曲線(xiàn)法，就是對應光度計中的定量測量功能。具體操作時(shí)第一步，把儀器的波長(cháng)調整到我們所需要的波長(cháng)，例如測量總磷直接把波長(cháng)走到697nm，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱(chēng)的調零。第三部把標準溶液放入樣品室，依次測量他們的吸光度，儀器一般會(huì )自動(dòng)記錄之后就會(huì )給出標準曲線(xiàn)方程，實(shí)驗完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之后用excel軟件進(jìn)行計算標準曲線(xiàn)。判斷做出的標準曲線(xiàn)是否能用，看哪個(gè)R值即那個(gè)相關(guān)系數，一般最少做出0.999就可以用了，差一點(diǎn)的儀器也可以做出0.99.
　　5、第五步：把未知樣品放入樣品室就可以直接測量出樣品濃度。

　　四、紫外分光光度計連續測量一個(gè)樣品，沒(méi)拿出來(lái)出現吸收值下降原因
　　這是由于開(kāi)始外壁上的溶液沒(méi)有擦干凈，需檢查一下儀器是否穩定，是否存在儀器造成的基線(xiàn)漂移，如果是同一個(gè)比色皿沒(méi)有更換待測樣品溶液的話(huà)，便是儀器的問(wèn)題，如果波動(dòng)范圍為千分之幾的波動(dòng)誤差，大可以忽略不計。另外，可在此波長(cháng)下，用純水連續多次測定來(lái)觀(guān)測機器的穩定性。有可能是儀器不太穩定：1.儀器沒(méi)有事先預熱，不穩定；2.光源已經(jīng)不行啦；3.聚集體隨著(zhù)時(shí)間分解了，感覺(jué)不對路兩種可能：氘燈壽命出了問(wèn)題；重新放入的樣如果不是一個(gè)容量瓶的話(huà)，建議做下溶液穩定性試驗考慮是否是檢測器的問(wèn)題，當拿出樣品打開(kāi)蓋光源遮住。