Western Blot哪種染色好？

　　蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗方法。其基本原理是通過(guò)特異性抗體對凝膠電泳處理過(guò)的細胞或生物組織樣品進(jìn)行著(zhù)色。通過(guò)分析著(zhù)色的位置和著(zhù)色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。Western Blot哪種染色好？您可知道？廣州市深華生物技術(shù)有限公司為您最新解析：

　　（1）陰離子染料是最常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測極限可達到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅s和快綠在檢測后容易從蛋白質(zhì)中除去，以便進(jìn)行隨后的氨基酸分析。缺點(diǎn)是溶劑系統的甲醇會(huì )引起硝化纖維素膜的皺縮或破壞。不能用于正電荷的膜。靈敏度低。
　　（2）膠體金，靈敏度高，檢測范圍可到pg級，但染色比穩定。
　　（3）生物素化靈敏度位于1、2之間，可用于任何一種膜。

　　Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：
　　i. 放射自顯影
　　ii. 底物化學(xué)發(fā)光ECL
　　iii. 底物熒光ECF
　　iv. 底物DAB呈色
　　現常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實(shí)驗條件的是用第一種方法，發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。只要買(mǎi)現成的試劑盒就行，操作也比較簡(jiǎn)單，原理如下（二抗用HRP標記）：反應底物為過(guò)氧化物+魯米諾，如遇到HRP，即發(fā)光，可使膠片曝光，就可洗出條帶。

　　值得一提的是，western blot 這個(gè)名稱(chēng)的由來(lái)很有意思。最開(kāi)始做印跡工作的是一個(gè)叫做Southern的科學(xué)家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術(shù)稱(chēng)為Southern blot，后來(lái)類(lèi)似的出現了兩個(gè)過(guò)程相似，但是對象不同的印跡方法，一個(gè)針對RNA，一個(gè)針對蛋白質(zhì)，人們分別把這兩種技術(shù)稱(chēng)為Northern和Western，與這兩個(gè)技術(shù)的發(fā)明人沒(méi)有關(guān)系了。