細胞活性檢查的原理與方法

　　1、訓練目的：了解細胞活性檢查的原理；掌握染料的配制方法；掌握細胞活性檢查方法。

　　2、實(shí)驗原理：細胞損傷或死亡時(shí)，某些染料可穿透變性的細胞膜，與解體的DNA結合，使其著(zhù)色。而活細胞能阻止這類(lèi)染料進(jìn)入細胞內，因此可以鑒別死細胞與活細胞。常用的染料有臺盼藍、苯胺黑、結晶紫。

　　3、實(shí)驗材料
　　①臺盼藍、苯胺黑、結晶紫溶液(溶于Hank's液或BSS液)。
　　②冷凍復蘇后的細胞或其他培養細胞。
　　③研缽、濾紙、漏斗、試劑瓶、標簽紙、顯微鏡、膠頭滴管、鑷子、載玻片、蓋玻片、計數器。

　　4、操作步驟
　　(1)配制染色液
　　①0.5％臺盼藍法：0.5g臺盼藍加熱溶于100 mLHank's液或BSS液中，貼標簽。
　�、�0.05％苯胺黑：0．05 g苯胺黑充分研磨后溶于100 mL Hank's液或BSS液中。苯胺黑對細胞毒性小，但溶解度差．配制后需過(guò)濾，貼標簽。
　　③0.1％結晶紫(用BSS液配制)法：0.1g結晶紫分別研磨溶于．100mL Hank's液或BSS液中，過(guò)濾后貼標簽。

　　(2)制備細胞懸液：調整細胞濃度在1×106個(gè)／mL左右。

　　(3)染色
　　①0.5％臺盼藍法：取少量細胞懸液，按1：1量加入0.5％臺盼藍染色液，充分混勻。靜置15 min，用膠頭滴管吸取細胞懸液，滴1滴于載坡片上，加蓋玻片。1min后用10x物鏡移動(dòng)視野觀(guān)察，計數100～200個(gè)細胞�；罴毎麍A形透明，死細胞染成藍色，用活細胞占計數細胞中的百分比表示細胞活力。
　　②0.05％苯胺黑法：使用時(shí)，苯胺黑液與細胞懸液以1：10混合，稍放置后鏡檢，死細胞染成黑色，活細胞不著(zhù)色。
　　③0.1％結晶紫法：細胞懸液與結晶紫液等量混合后，立即鏡檢，著(zhù)紫色的為活細胞。

　　5、注意事項
　　①染色時(shí)間不能太長(cháng)，否則活細胞也會(huì )逐漸積累染料而染成顏色，使檢測結果偏低。
　　②可結合細胞計數方法，同時(shí)進(jìn)行細胞計數和活力檢測。
　　③細胞活性檢查是細胞培養的基本技術(shù)。它是檢測不同藥物、生化物質(zhì)處理等效果的直觀(guān)簡(jiǎn)便手段，也是評定細胞冷凍效果的方法之一。在細胞凍存和復蘇過(guò)程中，由于細胞遭受非生理性的低溫打擊等，不可避免地對細胞產(chǎn)生影響，引起部分細胞活力下降或死亡，通過(guò)細胞活性檢查可快速檢驗細胞冷凍效果，是衡量細胞凍存、復蘇效果的一種簡(jiǎn)便易行的方法：染料排除法是檢查細胞活性常用的方法。
　　④檢查貼壁的細胞時(shí)，應先將細胞消化然后再進(jìn)行操作。