成功完成WB檢測，必須滿(mǎn)足的4個(gè)條件

免疫印跡（immunoblotting）又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達量差異。

成功完成Western Blot檢測，必須滿(mǎn)足4個(gè)條件：
凝膠洗脫：轉移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來(lái)，如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中，將無(wú)法在膜上進(jìn)行分析。
吸附到膜上：在轉移過(guò)程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無(wú)法在膜上進(jìn)行分析。
處理期間仍截留在膜上：在轉移后的處理過(guò)程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上。
處理過(guò)程中可接近：被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無(wú)法檢測。

成功進(jìn)行WB檢測，則設置合適正確的對照是必不可少的，只要正確設置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問(wèn)題所在，并保證實(shí)驗結果的準確性和特異性！一般需要設置的對照如下：
陽(yáng)性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用于檢測抗體的工作效率。
陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用于檢測抗體的特異性
二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性
內參對照：檢測標本的質(zhì)量和二抗系統
空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質(zhì)和封閉的效果