微量免疫電泳實(shí)驗

　　實(shí)驗方法原理：免疫電泳法（immunoelectrophoresis）是把蛋白質(zhì)電泳分離技術(shù)（瓊脂電泳）和免疫學(xué)檢測技術(shù)（雙向擴散）結合起來(lái)的檢測法。此法在微量的基礎上具有分辨率高，靈敏度高，時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，是很理想的分離和鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測定。在臨床診斷方面也有應用價(jià)值。

　　實(shí)驗材料：人IgG 兔抗人IgG

　　試劑、試劑盒：瓊脂，巴比妥鈉，牛血清白蛋白

　　儀器、耗材：電泳儀，水平電泳槽，打孔器，微量加樣器，牙簽，載玻片，恒溫水浴，小刀

　　實(shí)驗步驟    

　　1.瓊脂板的鋪制：鋪好瓊脂板，打孔劃槽，電泳時(shí)不要把槽中的瓊脂挑出來(lái)（槽的兩縱向平行邊先不劃開(kāi)）。

　　2.加樣：使瓊脂板的上孔里充滿(mǎn)抗原溶液，下孔里充滿(mǎn)著(zhù)指示蛋白。

　　3.電泳：同上操作方法，調電流強度為2～4mA/cm。當指示蛋白質(zhì)到達濾紙的邊緣時(shí)就可以停止電泳。一般需要40～60min。

　　4. 擴散：電泳結束后，從瓊脂板中間的槽里用牙簽挑出瓊脂凝膠，并加入免疫血清。將瓊脂板置溫盒內（或培養皿中），蓋好蓋子放置一夜。次日可以觀(guān)察到凝膠內出現的沉淀線(xiàn)。一般情況下每一沉淀線(xiàn)即代表一種抗原成分。根據沉淀的數量、位置可以判斷抗原的純度以及抗原蛋白質(zhì)的種類(lèi)。微量免疫電泳常用于分析樣品的血清成分。

　　5. 觀(guān)察：免疫電泳的圖譜可以直接觀(guān)察到抗原抗體沉淀線(xiàn)，也可以用0.1%的氨基黑染色后觀(guān)察。如果需要保存可以拍照。