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    免疫染色的前期樣品準備

    [2015/8/15]

      對于貼壁細胞:可以直接用多孔板,例如6孔板、24孔板等,培養細胞,然后到預定時(shí)間時(shí)進(jìn)行固定等后續操作。也可以用潔凈的蓋玻片,70%乙醇中浸泡后,用無(wú)菌的鑷子放置到6孔板內,然后用無(wú)菌的生理鹽水、PBS或培養液洗去殘留的乙醇。這時(shí)就可以種入細胞進(jìn)行培養,待細胞貼在蓋玻片上生長(cháng)良好后,即可進(jìn)行固定等后續操作。 

      對于懸浮細胞:把細胞先在固定液中固定,然后把細胞滴加在載玻片上,干燥后細胞會(huì )緊貼在載玻片上。然后就可以進(jìn)行后續操作。如果細胞的粘附能力不佳,可以在載玻片上用PDL等物質(zhì)進(jìn)行處理,以增強載玻片的粘附能力。  

      對于冷凍切片:切片放置在載玻片上后,可以直接進(jìn)行固定等后續操作。

      對于石蠟切片:脫蠟:切片在二甲苯中脫蠟5分鐘,再換用新鮮的二甲苯脫蠟,共用二甲苯脫蠟3次。無(wú)水乙醇5分鐘,兩次。90%乙醇5分鐘,兩 次,70%乙醇5分鐘,一次。蒸餾水5分鐘,兩次。
      抗原修復:根據不同的抗原和抗體,可以選擇把切片放置在如下抗原修復液中,10mM檸檬酸鈉,pH6.0,或1mM EDTA,pH8.0,或10mM Tris, pH10.0,95℃加熱12分鐘,大約在30分鐘內緩慢冷卻至室溫。


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