免疫電鏡技術(shù)組織的固定

    Singer于1959年首先建立了用電子密度較高的鐵蛋白(ferritin)標記抗體的方法，可對細胞表面抗原進(jìn)行超微結構定位。該技術(shù)為免疫電鏡技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎。Nakane與Pierce于1968年成功建立了免疫酶標記電鏡技術(shù)，使細胞內抗原的超微結構定位成為可能。Faulk和Taylor于1971年提出用膠體金(colloidalgold)標記抗體，并首先用于免疫電鏡研究，由此大大促進(jìn)了免疫電鏡技術(shù)的發(fā)展。

    免疫電鏡技術(shù)的取材要求更迅速更精細。與電鏡酶細胞化學(xué)標本制備相似，既要求保存良好的細胞超微結構，同時(shí)又要保持組織細胞的抗原性，但是，兩者間往往處于矛盾之中，也就是說(shuō)，強固定劑雖有利于超微結構的保存，但易導致抗原性明顯減弱，所以免疫電鏡的組織標本固定不僅要考慮超微結構的保存，亦應盡力保持其抗原性，故應選用較溫和的固定劑。常用固定劑有過(guò)碘酸―賴(lài)氨酸―多聚甲醛(periodate-lysine-paraformaldehyde，PLP)液和2％多聚甲醛―0．5％戊二醛混合液。在包埋前染色中，PLP較為常用，該固定液較適用于含糖類(lèi)豐富的組織，對超微結構及許多抗原活性保存較好。因為PLP中的過(guò)碘酸能氧化糖類(lèi)，使其中的羥基轉變?yōu)槿┗�，�?lài)氨酸的雙價(jià)氨基與醛基結合從而把抗原交聯(lián)起來(lái)。

    因組織抗原絕大多數含蛋白質(zhì)和糖類(lèi)。而抗原表位一般位于蛋白部分。PLP能選擇性地使糖類(lèi)交聯(lián)，這樣既穩定了抗原，又不影響抗原表位與抗體的結合。加入低濃度的多聚甲醛則能穩定蛋白與脂類(lèi)。但賴(lài)氨酸較貴，而多聚甲醛/戊二醛固定液相對經(jīng)濟簡(jiǎn)便，效果也較理想。