細胞培養在實(shí)驗過(guò)程中污染的原因

    污染是細胞培養的大敵。預防和避免污染是細胞培養成功的關(guān)鍵之一。一開(kāi)始就要十分重視，防止污染，否則會(huì )前功盡棄，不僅浪費時(shí)間，而且浪費人力、物力，甚至造成無(wú)法彌補的損失。 細胞培養中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種，分別是細菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染。他們在細胞培養中污染的特點(diǎn)如下： 

    1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會(huì )渾濁變黃，對細胞生長(cháng)影響明顯。   

    2、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會(huì )渾濁，原體感染，國內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

    3、黑膠蟲(chóng)：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去，培養液也是不渾的，一般不會(huì )太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長(cháng)狀態(tài)良好，且觀(guān)測到的運動(dòng)物無(wú)明顯增多，且培養液顏色、透明度無(wú)明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發(fā)現類(lèi)似現象。對細胞生長(cháng)狀態(tài)不會(huì )有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會(huì )自然消失，除更換血清外無(wú)須特殊處理。

    4、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開(kāi)始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。真菌生長(cháng)的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

    5、原蟲(chóng)：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點(diǎn)狀物數量非常多，輕微活動(dòng)，細胞雖然可以生長(cháng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會(huì )與細胞爭奪營(yíng)養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優(yōu)勢所以不會(huì )影響到細胞的正常生長(cháng)，只有當他們到達一定的數量時(shí)就會(huì )影響到細胞的生長(cháng)，最終形成惡性循環(huán)。

    6. 病毒：組織細胞培養過(guò)程中，如果沒(méi)有除去潛在的病毒，就會(huì )產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細胞的培養中已發(fā)現不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細胞不影響原代培養，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題

    7、非同種細胞污染 ：即是細胞交叉污染，由于細胞培養操作時(shí)各細胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴格分開(kāi)，往往會(huì )使一種細胞被另一種細胞污染。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實(shí)驗宣告無(wú)效。非細胞培養物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細胞培養所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。 在上述的八種污染物中，黑膠蟲(chóng)是現代細胞培養中討論比較多的，但大多數文獻未對其進(jìn)行描述或一帶而過(guò)，就像上面關(guān)于描述黑膠蟲(chóng)的情況是不完整，還有很多不明的情況。對其身份有多種猜測，到現在都沒(méi)有權威地對黑膠蟲(chóng)進(jìn)行分類(lèi)學(xué)上的歸類(lèi)。黑膠蟲(chóng)到底是不是一種生物，如果是那黑膠蟲(chóng)會(huì )是何種生物，如果不是，那黑膠蟲(chóng)會(huì )是什么？一系列的問(wèn)題都懸在奮斗在細胞生物學(xué)領(lǐng)域的學(xué)者們的心中。