細胞培養失敗的主要原因

  細胞培養，也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細胞培養都是一個(gè)必不可少的過(guò)程，細胞培養本身就是細胞的大規�？寺�。細胞培養，既包括微生物細胞的培養，細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。通過(guò)細胞培養得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。因為生物產(chǎn)品都是從細胞得來(lái)，所以可以說(shuō)細胞培養技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎的技術(shù)。消毒和滅菌微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因:

物理消毒法

  1.紫外線(xiàn)消毒:紫外線(xiàn)是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感，其次是陽(yáng)性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力最強。紫外線(xiàn)的直接作用是通過(guò)破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活，間接作用是通過(guò)紫外線(xiàn)照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒，用法簡(jiǎn)單，效果好。

  紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關(guān)，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時(shí)間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時(shí)間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間，每天照射2－3小時(shí)，期間可間隔30分鐘。燈管離地面2米以外要延長(cháng)照射時(shí)間，2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應超過(guò)1.5米，照射時(shí)間30分鐘為宜。

  紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害，且對培養細胞與試劑等也產(chǎn)生不良影響，因此，不要開(kāi)著(zhù)紫外等操作。

  3.高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白質(zhì)變性凝固而使微生物死亡。布類(lèi)、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養液都可以用這方法滅菌。

  不同壓力蒸汽所達到的溫度不同，不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時(shí)間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液體），應立即放到60-70℃烤箱內烘干，再貯存備用，否則，潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法，它具有條件簡(jiǎn)單、使用方便等特點(diǎn)。

 4.高溫干熱消毒:干熱滅菌主要是將電熱烤箱內物品加熱到160℃以上，并保持90－120分鐘，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的。主要用于滅菌玻璃器皿（如體積較大的燒杯、培養瓶）、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品（如粉劑、油劑）。

  干熱滅菌后要關(guān)掉開(kāi)關(guān)并使物品逐漸冷卻后在打開(kāi)，切忌立即打開(kāi)，以免溫度驟變而使箱內的玻璃器皿破裂。干烤箱內物品間要有空隙，物品不要靠近加熱裝置。

  燒灼也是滅菌方法之一，常利用臺面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進(jìn)行燒灼消毒。

  5.過(guò)濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過(guò)濾，使大于孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌目的。在體外培養時(shí)，過(guò)濾除菌大多用于遇熱容易變性而失效的試劑或培養液。