什么是流式細胞技術(shù)

　　流式細胞技術(shù)(flow cytometry,FCM)是利用流式細胞儀進(jìn)行的一種單細胞定量分析和分選技術(shù)。流式細胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。

　　流式細胞儀的基本結構和工作原理：流式細胞儀由三部分構成 1.傳感系統，包括樣本遞送系統、樣品池、檢測系統、電子傳感器和激光源等;2.計算機系統;3.電路、光路和水路系統，有電源、光學(xué)傳導和濾片、鞘液循環(huán)和回收部分等。流式細胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標記的細胞或微粒逐個(gè)通過(guò)樣品池，同時(shí)由熒光探測器捕獲熒光信號并轉換成分別代表前向散射角、側向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號，經(jīng)計算機處理形成相應的點(diǎn)圖，直方圖和加三維結構圖像進(jìn)行分析。用于FCM的樣本是單細胞懸液，可以是血液、懸浮細胞培養液、各種體液、新鮮實(shí)體瘤的單細胞懸液以及石蠟包埋組織的單細胞懸液等。

　　樣本制備的基本原則：1.使各種液體和懸浮細胞樣本新鮮，盡快完成樣本制備和檢測;2.針對不同的細胞樣本進(jìn)行適當洗滌、酶消化或EDTA處理，以清除雜質(zhì)，使粘附的細胞彼此分離而形成單細胞狀態(tài);3.對新鮮實(shí)體瘤組織可選用或聯(lián)用酶消化法，機械打散法和化學(xué)分散法來(lái)獲得足夠數量的單細胞懸液;4.對石蠟包埋組織應先切成若干40-50um厚的蠟片，經(jīng)二甲苯脫蠟到水后，再用前述方法制備單細胞懸液;5.單細胞懸液的細胞數不應少于10個(gè)。

　　流式細胞技術(shù)的應用：1.其測定細胞內DNA的變異系數最小，一般在2%以下;2.能準確地進(jìn)行DNA倍體分析;3.借助于熒光染料進(jìn)行細胞內蛋白質(zhì)和核酸的定量研究;4.快速進(jìn)行細胞分選和細胞收集;5.醫學(xué)應用：免疫功能研究各種干細胞的檢測，癌癥病人的多藥耐藥性，細胞功能及代謝動(dòng)力學(xué)研究，血小板分析(心血管疾病)，流式細胞術(shù)與分子生物學(xué)研究。