液相色譜柱的使用注意事項及再生

　　1 、色譜柱的使用說(shuō)明：

　　( 1 )、 色譜柱使用前注意事項：

　　色譜柱的儲存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評價(jià)報告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用 10 %左右的低濃度的有機相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。

　　( 2 )、 流動(dòng)相：

　　流動(dòng)相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò) 0.45μm 的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應該定期清洗或更換。

　　以常規硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的 PH 值適用范圍是 2.0-8.0 ， BDS C18 適合于堿性化合物， PH 值適用范圍為 2.0-10.0 。當必須要在 PH 值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。

　　( 3 )、 樣品：

　　樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預處理柱( SPE )對樣品進(jìn)行預處理;若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

　　2 、色譜柱的保存

　　( 1 )、 反相色譜柱每天實(shí)驗后的保養：

　　使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗完成后應用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗 30 分鐘。 注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入 10% 的甲醇，防止將填料沖塌陷。

　　( 2 )、 長(cháng)期保存色譜柱：

　　如色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷�，正相柱可以�(xún)Υ嬗趪栏衩撍�后的純正己烷中，離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒?含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中，并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。

　　3 、色譜柱的再生

　　因為色譜柱是消耗品，隨著(zhù)使用時(shí)間或進(jìn)樣次數的增加，會(huì )出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。

　　( 1 )、 反相柱的再生 ： 依次采用 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇：水 =10 ： 90 ( V/V )，乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

　　( 2 )、 正相柱的再生 ： 依次以 20-30 倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。

　　4 、色譜柱在使用過(guò)程中易出現的問(wèn)題和解決辦法

　　色譜柱在使用中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高，如果柱壓是在長(cháng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加，屬于正�，F象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高(系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外)，可能的原因有如下幾點(diǎn)：

　　( 1 )、色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染;

　　( 2 )、色譜柱頭的填料被樣品污染;

　　( 3 )、色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出;

　　( 4 )、流動(dòng)相 PH 值過(guò)大或過(guò)小使固定相結構破壞或溶解。

　　解決辦法如下：

　　( 1 )、如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在 10 %的稀硝酸內超聲清洗 10 分鐘，后再用純水超聲 10 分鐘，重新裝入色譜柱。

　　( 2 )、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。

　　( 3 )、如確定定是鹽結晶，用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。

　　( 4 )、如果因 PH 值使用不當，很難恢復。