流式細胞儀的工作原理

　　流式細胞儀主要由四部分組成：流動(dòng)室和液流系統，激光源和光學(xué)系統，光電管和檢測系統，計算機和分析系統。四大系統共同完成信號的產(chǎn)生、轉換和傳輸任務(wù)。檢測時(shí)將待測細胞或微粒制成細胞懸液，進(jìn)行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓人流動(dòng)室，在高壓下磷酸緩沖液(鞘液)從鞘液管?chē)姵�，鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著(zhù)樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形流束(鞘流)，待測細胞在鞘液包繞下單行排列，依次通過(guò)檢測區。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過(guò)聚焦后的光束，垂直照射在樣品流上，當細胞攜帶熒光素標記物通過(guò)激光照射區時(shí)，產(chǎn)生代表細胞內部不同物質(zhì)、不同波長(cháng)的熒光信號，這些信號以細胞為中心向空間360o 立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號。散射光包括前向角散射和側向角散射。前向角散射與被測細胞直徑的平方密切相關(guān)，反映細胞體積的大小。側向角散射光對細胞膜、胞質(zhì)及核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細胞內精細結構和顆粒性質(zhì)的信息。經(jīng)熒光染色的細胞受到適合的光波激發(fā)后產(chǎn)生的熒光通過(guò)光電轉換器轉變成電信號。最常用的光電轉換器是光電倍增管。從光電倍增管輸出的電信號需要經(jīng)過(guò)放大后才能被傳送到計算機，經(jīng)模/數轉換器傳輸到微機處理器形成數據文件，保存在計算機上。保存在計算機上的數據可在脫機后再進(jìn)行數據處理和分析。

　　細胞的分選是通過(guò)分離含有單細胞 的液滴而實(shí)現的。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的正負電荷偏轉板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉，落人各自的收集容器中，不予充電的液滴落人中間的廢液容器，從而實(shí)現細胞的分離。