凱氏定氮儀實(shí)驗過(guò)程中的注意事項

　　定氮蒸餾器以凱氏定氮法測定氮含量換算蛋白質(zhì)的方法，是國際上通用的標準方法，操作簡(jiǎn)單，測定結果重復性和重現性都很好，廣泛用于各種食品、谷物、飼料等樣品的蛋白質(zhì)含量測定。

　　(1)樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

　　固體樣品一般取樣范圍為0.20g~2.00g;半固體試樣一般取樣范圍為2.00g~5.00g;液體樣品取樣10.0mL~25.0mL(約相當氮30mg~40mg)。若檢測液體樣品，結果以g/100mL表示。

　　樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

　　(2) 樣品放入定氮瓶?jì)葧r(shí)，不要沾附頸上。萬(wàn)一沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低，或者用濾紙包裹好一起投入消化，濾紙影響通過(guò)空白扣除。消化時(shí)應注意旋轉凱氏燒瓶，將附在瓶壁上的碳粒沖下，對樣品徹底消化。若樣品不易消化至澄清透明，可將燒瓶中溶液冷卻，加入數滴過(guò)氧化氫后，再繼續加熱消化至完全。

　　(3)定氮蒸餾器中樣品消化時(shí)，不要用強火。若樣品含糖高或含脂及較多時(shí)，注意控制加熱溫度，以免大量泡沫噴出燒瓶，造成樣品損失�？杉尤肷倭啃链蓟蛞后w石蠟，或硅消泡劑減少泡沫產(chǎn)生。在整個(gè)消化過(guò)程中保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無(wú)硫酸存在的情況下，使氮有損失。喬躍電子消解爐能夠很好的解決此問(wèn)題。

　　(4)如硫酸缺少，過(guò)多的硫酸鉀會(huì )引起氨的損失，這樣會(huì )形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過(guò)多的被消耗或樣品中脂肪含量過(guò)高時(shí)，要增加硫酸的量;加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn);催化劑硫酸銅在有機物全部消化后，溶液顯清澈透明的藍綠色，可用它來(lái)指示消化終點(diǎn)。此外，硫酸銅還可用做下一步蒸餾時(shí)堿性反應的指示劑。過(guò)氧化氫，為氧化劑，有助于有機物消化，同時(shí)可以消除消化過(guò)程中的氣泡現象。

　　(5)定氮蒸餾器的蒸餾瓶中在加入濃堿時(shí)，往往出現褐色沉淀物，這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應，生成氫氧化銅，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。有時(shí)銅離子與氨作用，生成深蘭色的結合物2，加入氫氧化鈉是否足量,常常影響整個(gè)測定的順利進(jìn)行。由反應原理可知，當氫氧化鈉足量時(shí)有黑色氧化銅生成而使溶液呈淡黑色;當氫氧化鈉量不足時(shí)就無(wú)黑色氧化銅產(chǎn)生而使溶液呈淡藍色，所以有無(wú)氧化銅顏色存在是判斷氫氧化鈉是否足量的標志。

　　(6) 因蒸餾時(shí)反應室的壓力大于大氣壓力，故可將氨帶出。所以，蒸餾時(shí)，蒸氣要發(fā)生均勻，充足，蒸餾中不得�；饠鄽�，否則，會(huì )發(fā)生倒吸。停止蒸餾時(shí)，由于反應室外層的壓力突然降低，可使液體倒吸入反應室外層，所以，操作時(shí)，應先將冷凝管下端提高液面并清洗管口，再蒸一分鐘后關(guān)掉熱源。蒸餾是否完全，可用精密PH 試紙測冷凝管口的冷凝液來(lái)測定，中性則說(shuō)明已蒸餾完全。一般情況下建議使用半微量法，因為如果蒸餾失敗的話(huà)，半微量法還可繼續蒸餾，而常量法只好全部重來(lái)，費時(shí)費力。我們使用喬躍經(jīng)過(guò)多次蒸餾吸收實(shí)驗達到理想效果。

　　(7)混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒(méi)有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

　　(8) 吸收液也可以用0.01當量的酸代表硼酸，過(guò)剩的酸液用0.01N堿液滴定，而以硼酸為氨的吸收液，可省去標定堿液的操作，且硼酸的體積要求并不嚴格，亦可免去用移液管，操作比較簡(jiǎn)便。另外，硼酸吸收液的溫度不應超過(guò)40℃，否則氨吸收減弱，造成檢測結果偏低�？砂呀邮掌恐糜诶渌�浴中。

　　(9)在鹽酸標準溶液的配制時(shí)，必須將基準無(wú)水碳酸鈉于270-300℃灼燒至恒重后稱(chēng)取所須用量，否則也會(huì )影響蛋白質(zhì)測定結果的準確性。鹽酸標準溶液的濃度，常量法中取0.1M比較合適，半微量法中則在0.02～0.05M之間比較合適。