常用原代細胞培養之分散細胞培養

　　原代細胞培養中最常用的是分散細胞培養之一。分散細胞培養，即將組織塊用機械法或化學(xué)法使細胞分散。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性最好的游離細胞，經(jīng)典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細胞間的結合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細胞互相粘著(zhù)所依賴(lài)的Ca2+，再經(jīng)機械輕度振蕩，使之成為單細胞。

　　舉例：神經(jīng)細胞分散培養實(shí)驗-基本技術(shù)指南

　　從神經(jīng)組織解離到建立原代細胞培養通常需要幾天，甚至數周。這個(gè)過(guò)程不僅繁瑣， 還很單調。其實(shí)還有一種捷徑，幾個(gè)小時(shí)就能實(shí)現從神經(jīng)組織到體外培養細胞系的產(chǎn)生。 這個(gè)無(wú)縫的流程讓研究人員充分利用了寶貴的樣品，同時(shí)還有寶貴的時(shí)間。本文就舉個(gè)例 子，說(shuō)明一下從組織樣品到細胞培養的每一步。

　　步驟1：神經(jīng)組織解離

　　神經(jīng)組織的解離是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能夠將胚胎、新 生或成體來(lái)源的組織溫和解離成單細胞懸液。兩步的酶解過(guò)程只需要不到一個(gè)小時(shí)，就能 產(chǎn)生大量下游分析即用的活細胞。解離過(guò)程可以手工完成，也可自動(dòng)完成。

　　解離過(guò) 程如下：

　　將腦組織切成小塊，收集在HBSS中，300×g離心2分鐘 → 加入預熱的酶混 合物1，37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解離(手工解離或自動(dòng)解離)→ 加到30 μm 細胞濾器中，用HBSS洗滌兩次

　　步驟2：髓磷脂碎片的去除+神經(jīng)細胞的分離

　　獲得了單細胞 懸液之后，下一步就是目的細胞的分離。在細胞分離方面，MACS技術(shù)無(wú)疑是金標準，目 前發(fā)表的文獻已達12000多篇。別急，在細胞分離之前還有一個(gè)小插曲。那就是去除對后 續免疫標記有干擾的髓磷脂(myelin)。美天旎最近推出的Myelin Removal Beads能夠從 神經(jīng)細胞懸液中去除髓磷脂，標記+分離的全過(guò)程只需要35分鐘。

　　髓磷脂的去除是了為回收率。做過(guò)比對實(shí)驗，將步驟1得到的細胞懸液分成兩組，一組用Myelin Removal Beads處理，一組不處理。然后分別從兩組中分離神經(jīng)前體細胞。第一組 (處理過(guò))的回收率達95%，第二組(未處理)只有80%。

　　步驟3：神經(jīng)細胞培養 分離到了你想要的神經(jīng)細胞， 下一步就是原代細胞培養了。