如何正確的選擇Flag標簽抗體

　　在免疫沉淀IP&免疫熒光IF如何正確的選擇Flag標簽抗體?

　　Flag標簽系統是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統，廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術(shù)、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個(gè)研究領(lǐng)域。Flag標簽是一個(gè)與重組蛋白相融合的由8個(gè)親水氨基酸(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)組成的多肽片斷。FLAG標簽只有8個(gè)氨基酸組成，因此它不會(huì )占據其他表位與結合域，避免導致融合蛋白的功能、分泌性以及轉運發(fā)生改變。由于它的親水性特點(diǎn)，FLAG標簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結合以及被腸激酶酶解。

　　由于Flag標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，這一系統已用于各種細胞類(lèi)型，包括細菌、酵母和哺乳細胞。由于Flag標簽系統的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#E022060)可以用于檢測和Flag標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白等。比如在免疫熒光IF的實(shí)驗里，同時(shí)配合EarthOx的Dylight 549熒光二抗，使用該抗體可以準確的定位出Flag融合表達蛋白在細胞內的位置(如圖紅色顯示部分)。另外，做融合表達分析前，通過(guò)免疫共沉淀技術(shù)獲得Flag融合表達蛋白也是非常重要的一步，因此選擇一個(gè)合適的、可用于免疫共沉淀(Immunoprecipitation，IP)Flag標簽抗體也是很必要的。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#E022060)不僅能應用于細胞內定位的IF實(shí)驗，同樣還能應用于IP實(shí)驗。1:200甚至更高的IP實(shí)驗稀釋比率，也說(shuō)明了該抗體本身的具有很高的效價(jià)，同時(shí)，因為是單克隆抗體，因此特異性也很高。高效價(jià)所對應的高稀釋比率也意味著(zhù)超高性?xún)r(jià)比。

　　除了上面所說(shuō)的IP和IF實(shí)驗，Flag標簽抗體的基本應用還包括WB實(shí)驗，EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(貨號#E022060)在該應用中同樣表現優(yōu)異。說(shuō)明書(shū)的推薦起始稀釋比例是1:1000，但在如上圖所示的實(shí)驗中，在1:10000的稀釋比率下也表現優(yōu)異(EarthOx也進(jìn)行了50000次以后的稀釋?zhuān)�仍然顯示出很好的條帶顯示，沒(méi)有在說(shuō)明書(shū)里列出)。因此EarthOx的Flag標簽抗體不但能通過(guò)WB實(shí)驗很好的滿(mǎn)足融合蛋白表達量的分析，并且在免疫熒光IF、免疫沉淀IP的試驗中也有很好的表現，能滿(mǎn)足Flag標簽融合蛋白的細胞內定位以及純化的需要，而且其高效價(jià)和特異性，遠遠比其他Flag抗體具有更高的性?xún)r(jià)比