防脫片處理步驟

　　《一》載玻片和蓋玻片的處理

　　將載玻片或培養用的小蓋片浸泡在重鉻酸鉀濃硫酸清潔液中24小時(shí)，然后流水充分沖洗，再用蒸餾水沖洗3遍以上，而后置95%乙醇中12小時(shí)。取出擦干或烤干，貯放于玻片盒內備用。蓋玻片很薄，以上處理程序必須縮短時(shí)間，清潔液浸泡只需2小時(shí)，流水沖洗注意勿損傷玻片。

　　《二》黏附劑的使用

　　1.多聚左旋賴(lài)氨酸(poly-1—lysine) 首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋賴(lài)氨酸濃縮液，室溫下(18～26℃)可保存1年。使用時(shí).將試劑10倍稀釋成工作液，濃度為0.01%(ω/υ)，2—8℃冰箱保存，有效期3個(gè)月。使用方法是將充分洗凈和預先干燥的玻片浸泡于稀釋后的多聚左旋賴(lài)氨酸溶液數十秒或提拉十次，瀝干.于室溫下晾干12—24小時(shí)或在45℃以下烤箱內烘干。處理后的玻片避光干燥可長(cháng)期保存。

　　2.3—氨丙基—乙氧基甲硅烷(3—amino propyltriethoxy silane，APES) APES必須現用現配。用此方法黏合的玻片應垂直烤片而不能水平烤片，否則，組織片中易出現氣泡。APES的使用方法：用丙酮50倍稀釋(APESl份、丙酮49份混合)，將洗凈的玻片放人稀釋好的APES中，停留20～30秒，取出稍停，再人純丙酮或蒸餾水中涮去未結合的APES。置通風(fēng)櫥中晾干即可。注意用APES防脫片處理的載玻片撈片時(shí)組織應一步到位.并盡量減少氣泡存在，以免影響染色結果。注意不要將APES與其他防脫片劑混合使用。

　　多聚左旋賴(lài)氨酸為目前免疫組織化學(xué)染色中最常用的防脫片劑，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如效果不佳，可用雙重處理(APES和poly-l-lysine)的切片。在以上兩種方法均無(wú)效的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前放在A(yíng)PES l：50丙酮溶液中浸泡3分鐘，晾干后即可進(jìn)行下一步驟。

　　《三》免疫組織化學(xué)染色中常見(jiàn)脫片原因

　　1.組織固定、脫水、透明不充分。

　　2.組織切片過(guò)厚。

　　3.組織切片有折疊。

　　4.過(guò)度的熱抗原修復(高壓、微波、水煮)處理或抗原修復液的pH偏高。

　　5.操作過(guò)程中，沖洗方法不正確等。