細胞培養常見(jiàn)問(wèn)題分析

　　1. 何時(shí)須更換培養基?

　　視細胞生長(cháng)密度和生長(cháng)狀態(tài)而定，有的細胞消耗培養液較快，細胞有60-70%的匯合度就可以消化傳代，簡(jiǎn)單的換液不合適，因為細胞有可能處于缺營(yíng)養的狀態(tài);另外一種需要換液情況就是細胞狀態(tài)欠佳的時(shí)候，可以用PBS先洗滌一下，再更換完全培養液，去除那些死細胞和漂浮的狀態(tài)不好的細胞，可以調節一下細胞狀態(tài)。

　　2. 可否使用與原先培養條件不同之培養基?

　　不建議。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基，而且經(jīng)過(guò)一定時(shí)間馴化，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞都有可能出現不適應，表現出生長(cháng)緩慢，顆粒增多，有死細胞出現，造成細胞無(wú)法存活。也有些細胞在更換培養液后也能正常的生長(cháng)，細胞狀態(tài)也能維持，但是問(wèn)題往往出現在凍存后期的復蘇過(guò)程，有可能細胞沒(méi)法復蘇，所以不建議隨便更換培養基。

　　3. 可否使用與原先培養條件不同之血清種類(lèi)?

　　不建議。血清是細胞培養上一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)會(huì )產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會(huì )造成細胞無(wú)法存活。按照道理胎牛血清比小牛血清要好，但是在實(shí)際操作中未必如此，更換好的血清細胞同樣會(huì )有可能出現生長(cháng)狀態(tài)欠佳，另外就是，在細胞狀態(tài)欠佳的狀態(tài)，更換好的血清有可能會(huì )適得其反，加速細胞死亡，所以不建議隨便更換血清。

　　4. 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

　　FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

　　5. 細胞之接種密度為何?

　　依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無(wú)法生長(cháng)或狀態(tài)欠佳之重要原因。

　　6. 懸浮性細胞應如何繼代處理?

　　一般情況下可以加入新鮮培養基于原培養瓶中，稀釋細胞濃度即可，但不可以持續這樣操作，因為細胞的代謝物一直累積在培養液中，隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)，濃度越來(lái)越高，會(huì )影響細胞的生長(cháng)，所以建議稀釋細胞濃度傳代幾次后要做一次離心處理，去除培養液中長(cháng)期累積的代謝物，這樣有利于保持細胞的狀態(tài)。

　　7. 冷凍管應如何解凍?

　　取出冷凍管后，須立即放入37-40 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。