考馬斯藍染色法原理

　　考馬斯亮藍法也稱(chēng)考馬斯藍染色法(coomassie blue staining)又稱(chēng)Bradford法。由于其突出的優(yōu)點(diǎn)，正得到越來(lái)越廣泛的應用。

　　考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在488nm;當它與蛋白質(zhì)結合后變?yōu)榍嗌�，蛋白質(zhì)-色素結合物在595nm波長(cháng)下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時(shí)間內達到平衡，完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0～1 000μg/mL，最小可測2.5μg/mL蛋白質(zhì)，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。

　　考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質(zhì)的結合反應十分迅速，常用來(lái)作為蛋白質(zhì)含量的測定�？捡R斯亮藍R250與蛋白質(zhì)反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來(lái)對電泳條帶染色。

　　注意：

　　考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質(zhì)通過(guò)范德華力結合，反應快速，并且穩定，無(wú)法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細胞自然衰老脫落即可無(wú)礙。