血清，抗生素培養的特點(diǎn)

　　一、血清

　　細胞在單純的基礎培養基中不能存活，在特殊類(lèi)型的細胞培養中必須提供某些痕量營(yíng)養物質(zhì)及生長(cháng)因子才能使細胞得以生長(cháng)并維持生長(cháng)狀態(tài)�；�礎培養基常常要添加血清，血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來(lái)源須用經(jīng)驗確定，廣泛應用的血清種類(lèi)有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細胞用的血清，也用于細胞系和原代培養。而馬血清常常用來(lái)作有絲分裂后的神經(jīng)元培養。然而，很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養，也有人用馬血清來(lái)培養膠質(zhì)細胞。用大鼠進(jìn)行神經(jīng)元培養的某些研究者喜歡使用同型血清;人類(lèi)的胎盤(pán)血清，亦曾用于神經(jīng)組織的器官類(lèi)型的培養，也用在一些特殊培養種類(lèi)中。

　　血清的不同批號含有不同的成分，所以許多人發(fā)現，應該在使用前對血清進(jìn)行測試。大多數試劑商提供樣品，所滿(mǎn)意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加熱30分鐘，這一過(guò)程稱(chēng)為滅活。

　　二、抗生素

　　在細胞培養中最常用的抗生素是青霉素(常用濃度是25~100ui/ml)與鏈霉素(25~100μg/ml)。這兩種抗生素�；旌鲜褂�。在一些實(shí)驗室里，它們常規加入所有的培養基中。慶大霉素(10~100μg/ml)通常有廣譜抗菌效應，并具有溶液穩定性，故也被一些實(shí)驗室使用，特別是當有低水平的污染存在時(shí)更是這樣。以上這些試劑對霉菌與酵母菌的污染均無(wú)效。

　　盡管很多實(shí)驗室在細胞系的培養基中常規加入抗生素作繼代培養，但仍建議不要在原代培養中加入抗生素，其理由之一是獲得的細胞是無(wú)菌的，原代培養時(shí)的細菌污染很少發(fā)生。其次，盡管認為抗生素對細胞代謝的影響可忽略，但最好避免使用它們，以免細胞生長(cháng)環(huán)境的不穩定。最重要的是要意識到培養中主要污染物的類(lèi)型，它們通常暗示了問(wèn)題的來(lái)源。

　　三、抗有絲分裂劑

　　某些DNA合成抑制劑對分裂細胞有毒，但對沒(méi)有DNA合成的細胞僅有輕微影響。由于神經(jīng)元通常缺乏DNA合成能力，因此對抗有絲分裂劑沒(méi)有多大反應。這樣的試劑常常用于神經(jīng)元的培養，以消除或減少非神經(jīng)元群體。若要殺死所有的非神經(jīng)元細胞，可以先加入血清或生長(cháng)因子來(lái)保證有高比例的非神經(jīng)元細胞進(jìn)行DNA合成，此時(shí)再加入抗有絲分裂劑。但是，某些細胞在它的細胞周期的某些時(shí)相時(shí)對抗有絲分裂劑是不敏感的。不過(guò)，可以重復的將抗有絲分裂劑使用于增殖的細胞群體。在CNS神經(jīng)元的培養中抗有絲分裂劑常常在星形細胞形成單層后加入，此時(shí)，星形細胞由于接觸抑制而終止了DNA的合成(即細胞停止增殖)，它們不會(huì )因抗有絲分裂劑的加入而死亡。原代培養中用這種方法阻止成纖維細胞的過(guò)度增殖是十分必要的。有兩種抗有絲分裂劑常用于神經(jīng)元的培養：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制劑，一般使用濃度為～10μM。尿苷(10μM)也常使用，可阻止不分裂細胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。使用任何一種抗有絲分裂劑，都必須考慮它的神經(jīng)原毒性，應該確定最低效應的使用濃度。阿糖胞苷在很低的濃度下，也會(huì )對某些種類(lèi)的神經(jīng)元有毒性，可以造成特定神經(jīng)原的死亡。其他的抗有絲分裂劑尚未表現出這種毒性。

　　四、培養的保持

　　培養物是應該保持在孵箱中的。孵箱可以自動(dòng)將O2與CO2混合很快達到培養基的設計要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多。對于某些細胞的生長(cháng)，包括神經(jīng)原，應使氧含量處在一個(gè)較低的水平�？梢杂梅跸溥_到這個(gè)標準，但這樣的孵箱并未廣泛使用。

　　高濕度可避免培養皿中培養基的蒸發(fā)，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應該經(jīng)常換，乘水容器應經(jīng)常消毒以防霉菌生長(cháng)。若孵箱曾被霉菌孢子嚴重污染過(guò)，那么要想完全去除污染則會(huì )非常困難。當培養物必須要長(cháng)期保持在孵箱中時(shí)，應采用較少培養基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發(fā)，或采用相應的按比例供空氣的孵箱。

　　溫度的精確調節應定期檢查，孵箱溫度常設置為37℃或較低溫度。細胞在低溫時(shí)可有較長(cháng)時(shí)間的忍耐限度，但當溫度升至39℃時(shí)，幾小時(shí)內即死亡。

　　維持培養物的最佳方案常常改變。例如培養膠質(zhì)細胞時(shí)，要經(jīng)常換液以使其增殖達到最大。而在培養某些神經(jīng)原時(shí)，則要求盡可能少的換液，神經(jīng)原在兩次換液之間的條件下長(cháng)的最好。大腦皮質(zhì)的培養要求在不換液的情形下維持一個(gè)月以上。另一方面，象海馬神經(jīng)原那樣的細胞，倚賴(lài)于條件培養基，若換液太頻繁細胞就會(huì )衰退，此時(shí)，可采用1/3或1/2換液的方式。