培養用品的清洗和消毒

　　(一) 清洗

　　在組織細胞培養中，體外細胞對任何有害物質(zhì)都非常敏感。微生物產(chǎn)品附帶雜物，上次細胞殘留物及非營(yíng)養成分的化學(xué)物質(zhì)，均能影響培養細胞的生長(cháng)。因此對新使用和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗，且要根據器皿的組成材料不同，選擇不同的清洗方法。

　　1、玻璃器皿的清洗

　　小鼠細胞組織細胞培養中，使用量最大的是玻璃器皿，故工作最最大的是玻璃器皿的清洗。一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、侵酸和沖洗四個(gè)步驟。清洗后的玻璃器皿僅要求干凈透明無(wú)油跡，而且不能殘留任何物質(zhì)。

　　(1)浸泡：初次使用和培養使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附著(zhù)物軟化或被溶液掉。新的初次使用的玻璃器皿，在生產(chǎn)及運輸過(guò)程中，玻璃表面帶有大量的干固的灰塵，且玻璃表面常呈堿性及帶有一些對大鼠細胞細胞有害的物質(zhì)等。新瓶使用前應先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗，然后用稀鹽酸液(5)浸泡過(guò)夜，以中和其中的堿性物質(zhì)。再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過(guò)的蛋白質(zhì)，干固后不易洗掉，故用后要立即浸入水中，且要求完全浸入，不能留有氣泡或浮在液面上。

　　(2)刷洗：浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗滌劑刷洗，以除去器皿表面附著(zhù)較牢的雜質(zhì)。刷洗要適度，過(guò)度會(huì )損害器皿表面光澤度。

　　(3)浸酸：清潔液是由重鉻酸鉀、濃硫酸和蒸餾水按一定比例配制而成，其處理過(guò)程稱(chēng)為浸酸。清潔液對玻璃器皿無(wú)腐蝕作用，而其強氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質(zhì)。清潔液去污能力很強。是清洗過(guò)程中關(guān)鍵的一環(huán)。浸泡時(shí)器皿要充滿(mǎn)清潔液，勿留氣泡或器皿露出清潔液面。浸泡時(shí)間一般為過(guò)夜，不應少于6小時(shí)。 清潔液可根據需要，配制成不同的強度，常用的下列三種： 重鉻酸鉀(g) 濃硫酸(ml) 蒸餾水(ml) (A)強清潔液 63 1000 200000 B)次強清洗液 120 200 1000 (C)弱清潔液 100 100 100

　　清潔液配制時(shí)應注意安全，須穿戴耐酸手套和圍裙，并要保護好面部及身體裸露部分。配制過(guò)程中可使重鉻酸鉀溶于水中，然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌，使產(chǎn)生的熱量揮發(fā)，配制過(guò)程中可使重鉻酸鉀溶于水中，然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌，使產(chǎn)生的熱量揮發(fā)，配制溶液應選擇塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色。

　　(4)沖洗：玻璃器皿在使用后，刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗。使之盡量不留污染或潔液的殘跡。沖洗最好用洗滌裝置。即省力、效果又好。如用手工操作，則需流水沖洗十次以上，每天水須灌滿(mǎn)及倒干凈，最好用蒸餾水清洗3-5次，晾干備用。

　　2、膠塞的清洗

　　細胞培養中所用的橡膠制品主要是瓶塞。新購置的瓶塞帶有大量滑石粉及雜質(zhì)，應先用自來(lái)水沖洗，再做常規處理，常規清洗方法是：每次用后立即置入水中浸泡，然后用2% NaOH或洗衣粉煮沸10-20分鐘，以除掉培養中的蛋白質(zhì)。自來(lái)水沖洗后，再用1%稀鹽酸浸泡30分鐘或蒸餾水沖洗后再煮沸10-20分鐘，晾干備用。

　　3、塑料制品的清洗

　　塑料自制品現多是采用無(wú)毒并已經(jīng)特殊處理的包裝，打開(kāi)包裝即可用，多為一次性物品。必要時(shí)用2% NaOH浸泡過(guò)夜，用自來(lái)水充分沖洗，再用5%鹽酸溶液浸泡30分鐘，最后用自來(lái)水和蒸餾水沖洗干凈，晾干備用。

　　(二)消毒

　　細胞培養的最大危險是發(fā)生培養物的細菌，真菌和病毒等微生物的污染，污染主要是由于操作者的疏忽而引起，常見(jiàn)的原因有操作間或周?chē)�空間的不潔，培養器皿和培養液消毒不合格或不徹底，由于有關(guān)培養的每個(gè)環(huán)節的失誤均能導致培養失敗，故細胞培養的每個(gè)環(huán)節都應嚴格遵守操作常規，防止發(fā)生污染。

　　消毒方法分為三類(lèi)： (A) 物理滅菌法(紫外線(xiàn)、濕熱、過(guò)渣等)。 (B) 化學(xué)滅菌法(各種化學(xué)消毒劑)。 (C) 抗生素。

　　(1)紫外線(xiàn)消毒：用于空氣，操作臺表面和不能使用其它法進(jìn)行消毒和培養器皿。紫外線(xiàn)直接照射方便、效果好，經(jīng)一定的時(shí)間照射后，可以消滅空氣中大部分細菌，培養室紫外線(xiàn)燈應距地面不超過(guò)2.5米，且消毒進(jìn)物品不宜相互遮檔，照射不到的地方起不到消毒作用。

　　紫外線(xiàn)可產(chǎn)生臭氧，污染空氣，試劑及培養液都有不良影響，對人皮膚也有傷害，不宜近照射也進(jìn)行實(shí)驗操作。

　　(2)溫熱消毒：即高壓蒸氣消毒，是一種使用最廣泛、效果最好的消毒方法。溫熱消毒時(shí)，消毒物品不能裝得過(guò)滿(mǎn)，以防止消毒器內氣體阻塞而千百萬(wàn)危險，保證其內氣體的流通。在加熱升壓之前，先要打開(kāi)排氣閥門(mén)排放消毒器內的冷空氣，冷氣空氣排出后，關(guān)閉排氣閥門(mén)，同時(shí)檢驗安全閥活動(dòng)自如，繼后開(kāi)始升壓，當達到所需壓力時(shí)，開(kāi)始記算消毒時(shí)間。消毒過(guò)程中，操作者不能離開(kāi)工作崗位，要定時(shí)檢查壓力及安全，防止消毒及表皮意外事件發(fā)生。

　　上兩種是最常見(jiàn)的物理消毒方法。

　　常用物品消毒壓力及時(shí)間：

　　培養液、橡膠制品、10磅10分鐘;

　　布類(lèi)、玻璃制品、金屬器械、18磅20分鐘。

　　(3)化學(xué)消毒法：最常見(jiàn)的是70%酒精及1‰的新潔而滅，前者主要用于操作者的皮膚，操作臺表面及無(wú)菌室內的壁面處理。后者則主要用器械的浸泡及皮膚和操作室壁面的擦試消毒�；瘜W(xué)消毒法操作簡(jiǎn)單、方便有效。

　　(4)抗生素消毒：確切應記成抗生素滅菌，主要用于培養用液滅菌或預防培養物污染。