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    為何使用標記蛋白

    [2013/7/30]

      標記蛋白具有許多優(yōu)點(diǎn)。原則上,該方法為檢測各種細胞成分中感興趣的蛋白提供廠(chǎng)新的手段。

     、偃绻_(kāi)放閱讀框已經(jīng)被克隆化,但是由于蛋白是新發(fā)現的,或者由于蛋白免疫原性較弱, 目前尚沒(méi)有針對該蛋白產(chǎn)物的抗體時(shí),此標記技術(shù)具有重要的應用價(jià)值。隨著(zhù)基因組的研究,由基因工程進(jìn)入蛋白工程,標記技術(shù)顯得越來(lái)越重要。

     、谟捎跇擞浳锊皇翘烊坏鞍装被嵝蛄械墓逃胁糠,與標記物結合的試劑在進(jìn)行蛋白提純過(guò)程中,對蛋白功能產(chǎn)生影響的可能性較小。

     、壑灰邆溥m當的載體,標記蛋白可在任何細胞中進(jìn)行表達;例如,相同的標記蛋白既可在細菌中高效表達,又可在昆蟲(chóng)細胞系統中表達。

     、軜擞浳锏亩ㄎ惶匦砸约芭c其他分子的相互作用,可通過(guò)穩定轉染細胞中的表達進(jìn)行監測。標記物用于細胞染色和免疫印跡中檢測蛋白,對區分內源性的未標記蛋白和外源性蛋白效果較好。

     、輼擞浳锟捎糜诿庖叱恋碓囼,由于抗標記物抗體的高度特異性,可以檢測結合在標記蛋白上的其他感興趣的目的蛋白。

     、迾擞浖夹g(shù)可用于純化表達的蛋白,其特點(diǎn)是由于洗脫方法非常溫和,可以純化活性蛋白或蛋白復合物。

     、咭驗槊總(gè)標記物是獨特的,有可能在同一細胞表達系統中同時(shí)表達多種標記物以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用或進(jìn)行共定位(colocalization)。也可以使用多種標記物對同一蛋白或蛋白復合物進(jìn)行純化,如按順序地使用2種標記物純化蛋白質(zhì)時(shí),可取得較好的效果。

      隨著(zhù)標記物技術(shù)的廣泛應用,已出現了范圍越來(lái)越廣泛的商品化產(chǎn)品,極大地推動(dòng)了該技術(shù)的發(fā)展。表位作圖和新的標志蛋白以及蛋白和配體相互作用研究的成功,導致了大量新的標記系統不斷出現,然而目前還沒(méi)有適用于各種研究所需的標記物。在某些研究工作中,有必要使用多種不同的標記物,以證明標記物是否對蛋白活性產(chǎn)生影響。

      DNA重組標記技術(shù)的兩種主要用途是蛋白檢測和蛋白純化,但兩種應用目的對標記物的特性要求不同。雖然大多標記物可用于蛋白的檢測和蛋白純化,但是某些標記物只適用于其中之一。

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