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    植物轉基因技術(shù)

    [2013/7/11]

      (1)農桿菌介導轉化法 將外植體放入含有外源基因的農桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中浸泡,然后轉入共培養基,再轉入篩選培養基誘導抗性愈傷組織和抗性芽,生根后的抗性植株移栽至營(yíng)養缽生長(cháng)。

      (2)基因槍法 又稱(chēng)微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金;蜴u粒表面,然后在高壓的作用下,微粒被高速射入受體細胞或組織,微粒上的外源DNA進(jìn)入細胞后,整合到植物染色體上,得以表達,從而實(shí)現基因的轉化。

      (3)花粉管通道法 在植物授粉時(shí)將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開(kāi)花、受精過(guò)程中形成的花粉管通道,將外源DNA導入受精卵細胞,并進(jìn)一步地整合到受體細胞的基因組中,隨著(zhù)受精卵的發(fā)育而成為含轉基因的新個(gè)體。該方法于80年代初期由我國學(xué)者周光宇提出。我國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲(chóng)棉就是用花粉管通道法培育出來(lái)的。該法的最大優(yōu)點(diǎn)是不依賴(lài)組織培養人工再生植株,技術(shù)簡(jiǎn)單,不需要裝備精良的實(shí)驗室,常規育種工作者易于掌握。

      (4)微注射法 首先制備植物原生質(zhì)體,游離出細胞,在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下,將目的基因DNA通過(guò)微管注射到受體細胞中。

      (5)電穿孔法 在短時(shí)間的高壓直流電脈沖的沖擊下,可以使原生質(zhì)膜的分子疏松,形成暫時(shí)性的直徑為3~4nl-n的小孔,但對原生質(zhì)體生活力影響不大。這時(shí),存在于原生質(zhì)體周?chē)芤褐械耐庠碊NA,就可以通過(guò)這種小孔進(jìn)入原生質(zhì)體,實(shí)現基因的直接轉移。

      (6)微束激光打孔法 原生質(zhì)體在短時(shí)間的微束激光照射下,可在質(zhì)膜表面形成面積約0.25Pm2左右的小孔,使DNA分子進(jìn)入細胞。

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