細胞凍存與復蘇方法

　　細胞凍存方法

　　1.細胞：選對數生長(cháng)期細胞，收集細胞24小時(shí)前換液一次。

　　2.計數：按常規方法把細胞制成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。

　　3.凍存液：先用培養液9分+DMSO1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。

　　4.分裝：分裝入無(wú)菌安剖中，每安剖加1.5毫升細胞懸液。

　　5.封口：用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后，仔細檢查，定要封嚴，必要時(shí)可浸入藍色液中觀(guān)察，為安全起見(jiàn)，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線(xiàn)繩，末端扎有小牌，注明：細胞名稱(chēng)，凍存日期，以便日后查找。

　　細胞復蘇方法

　　1.從液氮罐中取出安剖;有時(shí)因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。

　　2.迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。

　　3.剪開(kāi)紗布口袋，取出安剖，用70%酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開(kāi)蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養液，吹打使細胞懸浮。

　　4.低速離心(500～1000轉/分)5分鐘，取上清后再重復用培養液漂洗、離心。

　　5.加入培養液適當稀釋后，再移裝入培養瓶中，置溫箱培養，次日更換一次培養液后再繼續培養。