胸腺肽的制備及檢定

　　(一) 原理胸腺肽是存在于人及多種動(dòng)物胸腺內的一組具有免疫調節活性的熱穩定性多肽。分子量多在8 000～13 000之間，等電點(diǎn)在35～95之間。胸腺肽的主要功能為誘導T細胞分化增殖，放大并增強成熟T細胞對抗原或其它刺激物的反應及維持機體免疫平衡狀態(tài)。由于它的分子量多是小于10 000的多肽，故基本無(wú)免疫原性，所以由一種動(dòng)物胸腺中提取的小分子多肽，可用于其它各種動(dòng)物及人類(lèi)，而不會(huì )引起超敏反應。在實(shí)際工作中，

　　主要從牛、豬、羊等動(dòng)物的胸腺中提取胸腺肽。

　　(二) 材料和方法

　　1 材料主要包括高速組織搗碎機、低溫冰柜、電熱攪拌器、離心機、不銹鋼濾膜濾器、超濾器、紫外分光光度計及檢測E玫瑰花環(huán)試驗所用儀器等。

　　2 方法

　　(1) 制備勻漿：將凍存的動(dòng)物胸腺取出融化，摘除脂肪及結締組織，洗凈，用絞肉機絞碎，將絞碎的胸腺內加入適量注射用水(約為胸腺的25倍)，用高速組織搗碎機高速勻漿2次，每次1min，將勻漿置-20℃凍結。

　　(2) 去除雜蛋白：凍結勻漿緩緩融化后，置電熱攪拌器上加熱至約80℃，并不斷攪拌，共加熱攪拌15min。以3 000r/min離心20min，棄沉淀，取上清。

　　(3) 澄清及超濾：將上述上清液用1μm濾膜加壓過(guò)濾，過(guò)濾后的液體其濁度不大于5度。將該澄清液體通過(guò)超濾器，用分子量10 000膜超濾，透過(guò)液即為胸腺肽溶液。

　　(4) 后處理：用Folin酚法測多肽含量，根據含量，分裝安瓿并凍干，封口后待檢定。

　　(三) 檢定

　　1 pH值取本品用酸度計準確測定酸堿度，其pH值應為6～75。

　　2 熱原取3只符合要求的家兔，按規定進(jìn)行觀(guān)察后，每只通過(guò)耳靜脈注入75mg/kg胸腺肽藥液，觀(guān)察體溫升高情況，如不符合規定，應取5只家兔復檢。判定標準為：在初試3只家兔中，體溫升高均在06℃以下，且3只家兔體溫升高總數在14℃以下時(shí);或在復試的5只家兔中，體溫升高06℃或06℃以上的家兔不超過(guò)1只，并且初試和復試合并8只家兔的體溫升高總數不超過(guò)35℃時(shí)，均認為供試品熱原檢查合格。

　　3 超敏反應取健康豚鼠6只，每只腹腔注射本品05ml，連續3次，于20天后即第4次自耳靜脈注入本品20ml，應無(wú)超敏反應現象發(fā)生。

　　4 急性毒性試驗取小鼠，自尾靜脈注入本品045ml，同時(shí)腹腔注射2～3ml，48h內不應有死亡。

　　5 無(wú)菌檢查將本品分別接種到用以檢測需氧菌、厭氧菌及霉菌用培養基上，37℃培養1周，應無(wú)菌生長(cháng)。

　　6 多肽含量測定用Folin酚法測定多肽含量，應符合規定。

　　7 活力測定采用E玫瑰花環(huán)試驗，對照管中加入淋巴細胞及綿羊紅細胞，試驗管中加入淋巴細胞、綿羊紅細胞及適量本品。試驗管的E玫瑰花環(huán)率應較對照管高10%以上為合格。

　　(四) 注意事項

　　1 胸腺勻漿時(shí)應細，眼觀(guān)應呈細膩狀，否則可延長(cháng)勻漿時(shí)間，增加勻漿次數。胸腺應采自幼齡動(dòng)物，且新鮮無(wú)異味。

　　2 各步驟所用餾水應均為無(wú)熱原注射用水。

　　3 過(guò)濾時(shí)，壓力不可過(guò)高，否則濾膜破裂，藥液則須重濾。