離心方法的選用

　　離心方法的選用

　　所分離的顆粒大小和密度相差較大:常速、高速離心;若從樣品液中分離2種以上大小和密度不同的顆粒：差速離心;超速離心:差速離心法和密度梯度離心法，后者又分速率區帶離心和等密度離心。

　　1、 差速離心

　　采用不同離心速度與時(shí)間，使不同沉降速度的顆粒分批分離;

　　差速離心法：

　　原理：采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心，使沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度及不同的離心時(shí)間下分批分離的方法，稱(chēng)為差速離心法。

　　當以一定離心力在一定的離心時(shí)間內進(jìn)行離心時(shí)，在離心管底部就會(huì )得到最大和最重顆粒的沉淀，分出的上清液在加上轉速下再進(jìn)行離心，又得到第二部分較大、較重顆粒的“沉淀”及含小和輕顆�！吧锨逡骸�，如此，多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較好分開(kāi)。這時(shí)所得沉淀是不純的，需經(jīng)再懸浮和再離心(2—3次)，才能得到較純顆粒。

　　常用于從組織勻漿中分離細胞和病毒。

　　2、 密度梯度離心

　　又稱(chēng)速率—區帶離心,沉降系數較接近的物質(zhì)分離的方法;

　　原理：不同顆粒之間存在沉降系數差時(shí)，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。

　　介質(zhì)梯度應預先形成，介質(zhì)的最大密度要小于所有樣品顆粒的密度。常用的有蔗糖、甘油;

　　密度梯度液的制備用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升高的密度梯度;

　　操作：離心前將樣品小心鋪放在密度梯度溶液表面，離心形成區帶。離心后不同大小、不同形狀、有一定沉降系數差異的顆粒在密度梯度液中形成若干條界面清楚的不連續區帶;

　　可用來(lái)分離核酸、蛋白質(zhì)、核糖體亞基及其它成分。

　　3、 等密度離心

　　原理：當不同顆粒存在浮力密度差時(shí)，在離心力場(chǎng)下，在密度梯度介質(zhì)中，顆�；蛳蛳鲁两�，或向上浮起，一直移動(dòng)到與它們各自的密度恰好相等的位置上形成區帶，從而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離;

　　區別:離心介質(zhì)、密度梯度范圍與密度梯度離心不同，欲分離的顆粒密度處于離心介質(zhì)密度范圍內。

　　介質(zhì)有：氯化銫、硫酸銫、溴化銫、三碘苯衍生物等。

　　操作：介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻，足夠時(shí)間離心。

　　介質(zhì)梯度不需預先制備，離心時(shí)把密度均一的介質(zhì)液和樣品混合后裝入離心管，通過(guò)離心形成梯度，讓顆粒在梯度中進(jìn)行再分配。常用來(lái)分離提取核酸、亞細胞器和質(zhì)粒。